申请/专利权人：杭州市食品药品检验研究院

申请日：2023-11-28

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN117737213A

主分类号：C12Q1/686

分类号：C12Q1/686;G01N30/02;G01N30/72;G01N30/86;C12Q1/6851

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.09#实质审查的生效;2024.03.22#公开

摘要：本发明一种利用核酸结合特征小肽鉴别牛源和植物源蛋白的方法，其核心技术是利用牛、羊、大豆、花生和核桃源实时荧光PCR检测体系对乳制品的牛源性、羊源性和大豆、核桃和花生源性成分进行定性检测，定量检测样品中牛、羊、植物源性DNA含量，从而鉴别乳制品中蛋白的来源及确认各蛋白组分的含量。本发明所述检测方法简单易操作，采用荧光PCR方法，结合液相色谱‑串联质谱及图谱数据库技术，建立准确、快捷、高通量的检测体系。可快速有效地甄别羊乳制品中掺假掺杂牛、大豆、花生源性成分，可实现基因水平的定量分析。

主权项：1.一种利用核酸结合特征小肽鉴别牛源和植物源蛋白的方法，其特征在于，该方法利用荧光PCR结合液相色谱-串联质谱及图谱数据库技术测定待测羊乳中是否含有牛源和植物源蛋白，同时测定其含量，具体包括以下步骤：1收集羊乳制品、以及牛乳、植物源蛋白；2以羊乳制品为样品进行DNA提取，以DNA纯度、DNA含量及PCR反应的ct值为考察目标，确定DNA提取程序；3选取特异性强的羊乳制品、牛乳及植物源蛋白的引物和荧光探针，制备不同质量浓度DNA溶液，制作标准曲线；4收集羊乳制品及牛乳、植物源蛋白，对不同蛋白进行一级结构测序分析，确定特征肽段，作为对应来源蛋白的标识物；建立酶解体系、肽段提取、回收及净化的实验条件；5开展分析羊乳制品、牛乳及植物源蛋白的特征肽段标识物在液相色谱的分离度、质谱检测器的灵敏度、肽段在ESI离子源电离下的电荷情况及准确质荷比、肽段碎片离子分布与碰撞能量变化的规律，确定合适的色谱分离条件；以羊乳制品为测试样品探索质谱法合适的前处理方法，分析样品中蛋白分离提取、断裂、肽的回收的条件，结合数据库中的质谱图谱，构建监测乳品中乳蛋白来源的LC-MSMS定量方法。

全文数据：

权利要求：

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