申请/专利权人：东南大学

申请日：2023-10-06

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN117737123A

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;C12N15/89;C12N15/90;A01K67/0278;A61K49/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.09#实质审查的生效;2024.03.22#公开

摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种Rasd1基因定点敲入2A‑Cre模型小鼠、构建方法及其应用。所述构建方法包括：确定小鼠Rasd1基因Exon2中适合插入的位点为site1；针对Rasd1基因site1设计构建gRNA序列以及构建2A‑Cre‑IRES‑EGFP序列的Donor载体；将gRNA和Cas9核酸酶的mRNA经体外转录后与Donor载体一起通过显微注射直接注射到C57BL6J小鼠的受精卵中，经长片段PCR鉴定，获得同源重组的F0代小鼠；将同源重组的F0代小鼠与C57BL6J小鼠交配获得阳性F1代小鼠，对阳性F1代小鼠进行PCR鉴定即可获得Rasd1基因定点敲入2A‑Cre的小鼠模型。基于本发明得到的小鼠模型进而为研究神经系统疾病以及其他慢性应激相关病病理机制以及筛选相应治疗方法和药物提供有效的研究模型。

主权项：1.一种Rasd1基因定点敲入2A-Cre的小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括下列步骤：1、确定小鼠Rasd1基因Exon2中适合插入的位点为终止密码子处；2、针对Rasd1基因设计构建gRNA序列以及构建2A-Cre-IRES-EGFP序列的Donor载体；所述gRNA序列如SEQIDNO.1所示3、将gRNA和Cas9核酸酶的mRNA经体外转录后与Donor载体一起通过显微注射直接注射到C57BL6J小鼠的受精卵中，经长片段PCR鉴定，获得同源重组的F0代小鼠；4、将同源重组的F0代小鼠与C57BL6J小鼠交配获得阳性F1代小鼠，对阳性F1代小鼠进行PCR鉴定即可获得Rasd1基因定点敲入2A-Cre的小鼠模型。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 东南大学 一种Rasd1基因定点敲入2A-Cre模型小鼠、构建方法及其应用

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