申请/专利权人：电子科技大学

申请日：2022-06-29

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN115074336B

主分类号：C12N9/00

分类号：C12N9/00;C12N15/866

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.22#授权;2022.10.11#实质审查的生效;2022.09.20#公开

摘要：本发明属于蛋白纯化技术领域，具体公开了一种具有磷脂翻转酶活性的蛋白纯化方法以及基于纯化方法所获得的具有磷脂翻转酶活性的蛋白。该具有磷脂翻转酶活性的蛋白的纯化方法包括：构建目的蛋白的2MBP标签蛋白表达载体形成重组蛋白；对重组蛋白进行表达后进行蛋白纯化；利用亲和层析分离获得半成品蛋白后直接去除其上的2MBP标签，获得目的蛋白。本发明提供的纯化方法选择2MBP标签加入，进而收获更大产量的具有磷脂翻转酶活性的蛋白，可以为体外进行功能活性的大分子机器重组提供条件。本发明还具有纯化方法简单，易于产业化实现的特点。

主权项：1.一种具有磷脂翻转酶活性的蛋白的纯化方法，其特征在于，包括：构建目的蛋白的2MBP标签蛋白表达载体形成重组蛋白；对重组蛋白进行表达后进行蛋白纯化；在亲和层析后直接在柱材上酶切过夜，去除2MBP标签以获得目的蛋白；所述形成重组蛋白，包括：提供原始蛋白，在所述原始蛋白的基因C段连入TEV酶切位点和2个MBP标签，形成重组蛋白基因；将所述重组蛋白基因转至pFastBacDual表达载体上，将所述pFastBacDual表达载体转至Sf9昆虫细胞；所述原始蛋白为Opsin蛋白。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 电子科技大学 一种具有磷脂翻转酶活性的蛋白及其纯化方法

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