申请/专利权人：中国林业科学研究院林产化学工业研究所

申请日：2022-03-21

公开（公告）日：2024-03-22

公开（公告）号：CN114525269B

主分类号：C12N11/089

分类号：C12N11/089;C12N11/14;C12N9/02

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.22#授权;2022.06.10#实质审查的生效;2022.05.24#公开

摘要：本发明公开了一种基于聚乙二醇（PEG）和超顺磁性氧化铁纳米颗粒（SPION）共价结合固定化漆酶的方法，具体步骤如下：在室温下，将3‑氨基丙基‑三甲氧基硅烷（APTE）溶液缓慢加入氨基聚乙二醇醛基（NH2‑PEG‑CHO）溶液后高速搅拌一段时间后可生成产物AP‑PEG，再缓慢加入谷氨酸水溶液继续高速搅拌可生成产物AP‑PEG‑CHO；接着继续缓慢加入用缓冲液溶解的漆酶搅拌一段时间后可生成产物LA@PEG，最终缓慢加入SPION溶液密封搅拌一段时间可制备终产物LA@PEG@SPIONs，即固定化漆酶，经有机混合溶剂多次洗涤，直到未检测到漆酶，真空干燥后获得灰色粉末LA@PEG@SPION。所获固定化漆酶较游离漆酶具有更高的热稳定催化活性，可磁性回收重复利用，降低使用成本，提高生产经济效益等特点。

主权项：1.一种基于聚乙二醇和超顺磁性氧化铁纳米颗粒共价结合固定化漆酶的方法，具体步骤如下：在室温下，将3-氨基丙基-三甲氧基硅烷溶液缓慢加入氨基聚乙二醇醛基溶液后高速搅拌一段时间后可生成产物AP-PEG，再缓慢加入谷氨酸水溶液继续高速搅拌可生成产物AP-PEG-CHO，接着继续缓慢加入用缓冲液溶解的漆酶搅拌一段时间后可生成产物LA@PEG，最终缓慢加入超顺磁性氧化铁纳米颗粒SPION溶液密封搅拌一段时间可制备终产物LA@PEG@SPIONs，即固定化漆酶，经有机混合溶剂多次洗涤，直到未检测到漆酶，真空干燥后获得灰色粉末LA@PEG@SPION，具体包括以下五个步骤：第一步，形成AP-PEG的过程：适量的3-氨基丙基-三甲氧基硅烷溶液与一定量的氨基聚乙二醇醛基溶液后在一定的时间和搅拌速率等反应条件下形成AP-PEG，适量的3-氨基丙基-三甲氧基硅烷溶液是指50～100mg，用5～10mLDMSO溶解，所述的一定量的氨基聚乙二醇醛基溶液具体是指1000～1500mg用10～15mLDMSO溶解后，所述的在一定的时间和搅拌速率条件下是指在600～1000rpmmin速率下室温搅拌2～4h形成AP-PEG；第二步，形成AP-PEG-CHO的过程：在上述形成的AP-PEG溶液中继续添加适量的谷氨酸水溶液在一定条件下反应生成AP-PEG-CHO，可作为漆酶和SPION载体的支撑基，所述的添加适量的谷氨酸水溶液在一定条件下反应生成AP-PEG-CHO中谷氨酸质量浓度为50～70％，添加量为2～6mL，和在600～800rpmmin速率下室温搅拌1～4h；第三步，形成LA@PEG的过程：在上述获得的AP-PEG-CHO溶液中继续添加适量的漆酶溶液在一定条件下进行搅拌反应可生成LA@PEG，所述的继续添加适量的漆酶溶液后在一定条件下进行搅拌反应具体是指用pH5.0乙酸-乙酸钠缓冲液溶解的漆酶配置成浓度为1.0mgmL的溶液，其体积使用量为5～10mL，在一定的时间和搅拌速率条件下是指在600～1000rpmmin速率下室温搅拌2～4h；第四步，形成LA@PEG@SPIONs：在形成LA@PEG的溶液中适量添加SPIONs溶液在一定条件下进行搅拌反应可生成LA@PEG@SPIONs，所述的适量添加SPIONs溶液是指用30～100mL二甲基亚砜溶解分散SPION30～100mg均匀配置成1～10mgmL溶液，所述的在一定条件下进行搅拌反应可生成LA@PEG@SPIONs是指在500～1200rpm搅拌速率和室温下进行12～72h的时间反应；第五步，除杂并干燥处理：用有机混合溶剂多次洗涤，直到未检测到漆酶，并在一定温度下进行真空干燥最终获得灰色粉末LA@PEG@SPION，所述的用有机混合溶剂进行洗涤是指用乙醇和蒸馏水以体积比1％～99％混合，在一定温度和真空条件下进行真空干燥是指在20～30℃下，真空压力为0.01～0.1Mpa，真空干燥时间3～9h。

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