申请/专利权人：爱尔眼科医院集团股份有限公司

申请日：2023-12-26

公开（公告）日：2024-03-29

公开（公告）号：CN117778320A

主分类号：C12N5/079

分类号：C12N5/079;C12N5/0793;C12Q1/02

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.16#实质审查的生效;2024.03.29#公开

摘要：本发明公开一种角膜体外模型的构建方法及的角膜体外模型的应用方法，本发明角膜体外模型的构建方法，用载有角膜基质细胞的塑压胶原膜作为基质层贴在插入式培养皿上，在下表面接种内皮细胞形成内皮层，在胶原膜的上表面接种神经细胞形成神经束，再接种上皮细胞形成多层结构的上皮层，本发明通过气液界面培养，构建的角膜体外模型具有完整的上皮、神经、基质和内皮层，可以在体外模拟天然角膜的结构，满足体外角膜相关药物测试和疾病造模的需求。

主权项：1.一种角膜体外模型的构建方法，其特征在于包括以下步骤：1胶原膜的制备：将角膜基质细胞培养至对数期，用胰蛋白酶消化收集，调整悬液浓度，同时调整pH值，充分混匀后，倒入孔板中，37℃孵育后，倒出进行塑压，以排出凝胶中的水分得到胶原膜，塑压后的胶原膜贴在孔板的插入式培养皿的上表面，加入含有小牛血清和FGF的DMEMF12培养液培养2天；2内皮层的接种：角膜内皮细胞用胰蛋白酶消化收集，调整悬液浓度，取悬液至插入式培养皿下表面，孵育使细胞贴壁，然后继续在含有小牛血清和FGF的DMEMF12培养液培养2天，在插入式培养皿的下表面形成内皮层；3神经细胞接种：取神经细胞接种在胶原膜的上表面，在下层加入神经生长培养液培养7天，使神经束充分生长；4上皮细胞培养：取角膜上皮细胞，接种在长有神经整的胶原膜的上表面，待其贴壁后，进行气液面培养，使上皮形成多层结构。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 爱尔眼科医院集团股份有限公司 一种角膜体外模型的构建方法及角膜应用方法

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