申请/专利权人：西部(重庆)科学城种质创制大科学中心;西南大学

申请日：2023-12-26

公开（公告）日：2024-03-29

公开（公告）号：CN117778297A

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071;A61K35/52;A61P15/00;C12R1/91

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.16#实质审查的生效;2024.03.29#公开

摘要：本发明属于水产生物技术领域，涉及一种尼罗罗非鱼精巢间质细胞系的建立方法。包括：1分离和消化尼罗罗非鱼精巢组织；2取消化后细胞，加入含有20ngmL青鳉胶质细胞源神经营养因子a的培养基获得单细胞悬液进行培养；3细胞铺板24h后，分离未贴壁细胞继续培养；4挑取单细胞克隆进行传代培养，RT‑PCR检测细胞不表达vasa、amh、wt1a，表达sf1、star1，且经生殖孔移植可成功定植于尼罗罗非鱼精巢，并表达Cyp11b2和3β‑HSD，对鉴定的精巢间质细胞进行传代培养。本发明获得了在体外能够稳定增殖的尼罗罗非鱼精巢间质细胞系，这对于鱼类雄激素产生及其调控相关研究具有重要价值。

主权项：1.一种尼罗罗非鱼精巢间质细胞系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：1分离和消化尼罗罗非鱼精巢组织；2取消化后细胞，加入培养基获得单细胞悬液，并于细胞板中培养；所述培养基为含有0.5颗mL尼罗罗非鱼胚胎提取物、20ngmL尼罗罗非鱼白血病抑制因子、20ngmL青鳉胶质细胞源神经营养因子a、10ngmL人碱性成纤维细胞生长因子、1％虹鳟血清、15％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠、2mM亚硒酸钠、1mM非必需氨基酸、100μMβ-巯基乙醇的高糖DMEM培养基；3细胞铺板24h后，分离未贴壁细胞，将其转移至新的细胞板中继续培养；4挑取单克隆并进行传代培养，连续培养40代以上，鉴定获得的细胞为尼罗罗非鱼精巢间质细胞系。

全文数据：

权利要求：

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