申请/专利权人：江苏睿玻生物科技有限公司

申请日：2023-12-28

公开（公告）日：2024-03-29

公开（公告）号：CN117778602A

主分类号：C12Q1/689

分类号：C12Q1/689;C12Q1/70;C12Q1/6893;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/01;C12R1/36;C12R1/35;C12R1/90;C12R1/92

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.16#实质审查的生效;2024.03.29#公开

摘要：本发明公开了一种利用溶解曲线法同时检测10种生殖病原体核酸的恒温扩增检测试剂盒，10种生殖病原体为沙眼衣原体、淋病奈瑟菌、人型支原体、生殖支原体、解脲脲原体、微小脲原体、单纯疱疹病毒1型、单纯疱疹病毒2型、梅毒螺旋体、阴道毛滴虫，试剂盒包括：扩增反应液、酶反应液、探针。本发明是等温扩增结合溶解曲线的分析方法，不同于SAT方法使用分子信标进行同步放大检测方式，由于等温扩增的产物主要为RNA单链，故可以反应完成后的终点检测的溶解曲线分析进行检测，在设计结合探针时，相同荧光通道设计为不同的溶解温度TM值，通过溶解曲线溶解峰的差异达到判断不同指标的目的。

主权项：1.一种利用溶解曲线法同时检测10种生殖病原体核酸的恒温扩增检测试剂盒，10种生殖病原体为沙眼衣原体、淋病奈瑟菌、人型支原体、生殖支原体、解脲脲原体、微小脲原体、单纯疱疹病毒1型、单纯疱疹病毒2型、梅毒螺旋体、阴道毛滴虫，其特征在于：试剂盒包括：1扩增反应液：含10-150mMKCl，5-30mMMgCl2，10-150mMTris-HCl，0.1-5mMdNTP,0.1-8mMNTP，3％-30％甘油，1-20mMDTT，0.1-5mM精氨酸，0.05-2mM甲酰胺，0.05-2μM扩增引物1，0.05-2μM扩增引物2；扩增引物有十对：沙眼衣原体、淋病奈瑟菌、人型支原体、生殖支原体、解脲脲原体、微小脲原体、单纯疱疹病毒1型、单纯疱疹病毒2型、梅毒螺旋体、阴道毛滴虫，具体的：1沙眼衣原体的扩增引物：CT-扩增引物1：TTTGAGTTCTGCTTCCTCCTTGCCT-扩增引物2：AATTCTAATACGACTCACTATAGGGGCAAGGATCGCAAGGATCTCC2淋病奈瑟菌的扩增引物：NG-扩增引物1：CGCACAACTCTCAAACCGAAGNG-扩增引物2：AATTCTAATACGACTCACTATAGGGCAGAAGTGCGTTTGGAGAAGTC3人型支原体的扩增引物：MH-扩增引物1：TTTGGTCAAGTCCTGCAACGAMH-扩增引物2：AATTCTAATACGACTCACTATAGGGCCCCACCTTCCTCCCAGTTA4生殖支原体的扩增引物：MG-扩增引物1：CATAGTTCATTATGCGCACCAGTTACTTGMG-扩增引物2：AATTCTAATACGACTCACTATAGGGCTCTTTAACAACAGGGGTTGGGATTAG5解脲脲原体的扩增引物：UU-扩增引物1：CATTGATGTTGCACAAGGAGUU-扩增引物2：AATTCTAATACGACTCACTATAGGGCGTGATTTTAATGTATCGGCTTTC6微小脲原体的扩增引物：UP-扩增引物1：CATTGATGTTGCACAAGGAGUP-扩增引物2：AATTCTAATACGACTCACTATAGGGCGTGATTTTAATGTATCGGCTTTC7单纯疱疹病毒1型的扩增引物：HSV1-扩增引物1：TCCTCGAAGTACACGTAGCCCHSV1-扩增引物2：AATTCTAATACGACTCACTATAGGGTACAGCCGCCCCCTGGT8单纯疱疹病毒2型的扩增引物：HSV2-扩增引物1：TCCTCGAAGTACACGTAGCCCHSV2-扩增引物2：AATTCTAATACGACTCACTATAGGGTACAGCCGCCCCCTGGT9梅毒螺旋体的扩增引物：TP-扩增引物1：CGCTATTTCTCGTCGCTGGTTP-扩增引物2：AATTCTAATACGACTCACTATAGGGGAACGTGCCTGCCTCCCC10阴道毛滴虫的扩增引物：TV-扩增引物1：GGCTGATGAGGAGTAGGGTTTTV-扩增引物2：AATTCTAATACGACTCACTATAGGGGGCGGAGAAAAATAGTATGCGTTGC2酶反应液：1-800U逆转录酶，10-1000URNA聚合酶，0-200URNA酶抑制剂，10％-50％甘油10-200mMTris-HCl，20-200mMKCl，0.1-5mMDTT，0.1-1μgμLBSA，0-0.5U核糖核酸酶H；3探针0.05-2μM，探针是一种或多种荧光探针，荧光探针的类型为taqman荧光探针、分子信标或蝎型探针。

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