申请/专利权人：浙江大学

申请日：2022-08-22

公开（公告）日：2024-03-29

公开（公告）号：CN115452974B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.29#授权;2022.12.27#实质审查的生效;2022.12.09#公开

摘要：本发明公开了一种测定饲料中大观霉素的方法。试样中大观霉素用2%三氯乙酸水溶液（含0.4%乙二胺四乙酸二钠）提取，提取液经调节pH值至4.7±0.2，由混合型阳离子固相小柱净化，采用HILIC色谱柱分离，液相色谱质谱‑质谱联用法测定，基质匹配外标法定量。结果表明：本发明建立的固相萃取‑超高效液相色谱‑串联质谱法对饲料中大观霉素检出限为1.0mgkg，定量限为2.0mgkg。不同饲料基质中大观霉素浓度在0.1~10.0μgmL范围内线性关系良好，相关系数（R2）均大于0.99。大观霉素的回收率为91.3%~104.2%，相对标准偏差（RSD）为1.5%~9.4%。本发明建立的固相萃取‑超高效液相色谱‑串联质谱法灵敏、可靠，可应用于饲料中大观霉素的准确测定。

主权项：1.一种饲料中大观霉素的测定方法，其特征是：步骤如下：称取待测饲料2.5g，置于50mL塑料离心管中，加入23mL2％三氯乙酸水溶液，再加入2mL5％EDTA-2Na溶液，常温水浴超声20min，于8000rmin离心5min，转移上清液至另一只50mL离心管中；将沉淀重复提取一次并离心，合并两次上清液，混匀；准确移取3mL提取液至10mL塑料离心管中，用10％氨水溶液准确调节pH至4.7±0.2后，于8000rmin离心5min，制得样品备用液；依次用3mL甲醇和3mL水活化MCX固相萃取小柱，将样品备用液全部上样，分别用3mL水和3mL甲醇淋洗，抽干；用3mL10％氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，于40℃氮气吹干，准确加入3mL样品溶解液，其中流动相A和B各50％，复溶，过0.22μm有机滤膜，待UPLC-MSMS检测，基质匹配外标法定量；所述的流动相A为0.01molL甲酸铵水溶液，含0.4％甲酸，称取0.63g甲酸铵，用100mL水溶解，再加入4mL甲酸，用水定容至1000mL，混匀；所述的流动相B为0.01molL甲酸铵乙腈-水溶液，含0.4％甲酸，称取0.63g甲酸铵，用100mL水溶解，再加入4mL甲酸，用乙腈定容至1000mL，混匀；所述的2％三氯乙酸水溶液为三氯乙酸2mL，加水稀释至100mL；所述的5％EDTA-2Na溶液为EDTA-2Na5g，加水溶解并稀释至100mL；所述的10％氨水溶液为氨水10mL，加水稀释至100mL；所述的10％氨水甲醇溶液为氨水10mL，加甲醇稀释至100mL。

全文数据：

权利要求：

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