申请/专利权人：通用生物(安徽)股份有限公司

申请日：2023-12-05

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN117802133A

主分类号：C12N15/70

分类号：C12N15/70;C12N15/65;C12R1/19

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.19#实质审查的生效;2024.04.02#公开

摘要：本发明公开了一种提升长基因合成效率的方法，属于基因合成技术领域，该方法包括如下步骤：第一步、基因分段；第二步、2‑3kb中间片段基因合成；第三步、10kb基因全长合成；实现10k基因的快速高效合成。在多段重组时多加入一个CmR基因的片段，利用双抗的平板进行筛选，来自组装片段包括CI基因片段不能在双抗平板上生长，未酶切干净的载体不能在双抗平板上生长，排出来自载体和插入片段模板的背景污染，提升组装筛选的成功率。此外本发明改进了基因合成的流程，在中间片段的构建过程，利用phi29DNA聚合酶扩增重组单菌落，纯化后进行测序分析并作为下一轮组装的模板，无需进行大肠杆菌培养，节省了时间和成本。

主权项：1.一种提升长基因合成效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：第一步、基因分段：将10kb基因分段为4个2-3kb片段记作A、B、C、D，分别将A、B、C、D分段为12个800-900bp小段记作Ab、Ac、Ad、Ba、Bb、Bc、Bd、Ca、Cb、Cc、Cd、Da、Db、Dc、Dd；800-900bp小段基因合成：通过引物设计软件将12个800-900bp小段分别设计成相互重叠15-20bp的oligo，经PCA聚合酶链式组装，与Puc57载体重组，导入DH5a感受态细胞，进行菌落PCR、扩增验证；第二步、2-3kb中间片段基因合成：A片段合成：设计PCR扩增引物，以测序正确的Aa、Ab、Ac等温扩增产物为模板进行PCR扩增，同时在A片段的尾端加入CmR片段，与Puc57-Kan载体重组，导入DH5a感受态细胞，卡那和氯霉素双抗筛选，进行菌落PCR、扩增验证；B、C、D片段合成同A；第三步、10kb基因全长合成：设计PCR扩增引物，以测序正确的A、B、C、D等温扩增产物为模板进行PCR扩增，同时加入CmR片段，与线性化的pet-28a+载体重组，导入DH5a感受态细胞，卡那和氯霉素双抗筛选，37℃过夜培养，次日菌落筛选PCR验证，挑取验证正确的克隆进行质粒提取、测序验证、酶切验证。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 通用生物(安徽)股份有限公司 一种提升长基因合成效率的方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD