申请/专利权人：北京博奥医学检验所有限公司

申请日：2023-12-29

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN117802203A

主分类号：C12Q1/6806

分类号：C12Q1/6806

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.19#实质审查的生效;2024.04.02#公开

摘要：本发明公开了一种基于CRISPR技术降低福尔马林固定石蜡包埋样本中宿主核酸占比的方法及其试剂盒，所述方法特异性高、不受样本细胞状态的影响且不具有微生物偏好性，可减少微生物核酸的损失，进而提高样本微生物检出能力，能够更加真实准确地鉴定宏基因组中的微生物，适用于推广应用。

主权项：1.一种基于CRISPR技术特异性去除福尔马林固定石蜡包埋样本中宿主核酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1从福尔马林固定石蜡包埋样本中提取宏基因组总核酸，得到包含宿主基因组DNA的宏基因组核酸样品；2配制sgRNA-dCas9复合物，所述sgRNA-dCas9复合物包括复合物一dCas9-Alu_sgRNA、复合物二dCas9-L1_sgRNA；3配制反应体系，所述反应体系包含步骤1中所述的核酸样品、步骤2中所述的sgRNA-dCas9复合物，在缓冲液中反应；4用包被有链霉亲和素的磁珠捕获sgRNA-dCas9复合物和其结合的宿主DNA，形成磁珠-蛋白-RNA-DNA复合物；5磁力分离去除磁珠-蛋白-RNA-DNA复合物，回收上清，达到去除福尔马林固定石蜡包埋样本中宿主核酸的目的；优选地，所述复合物一dCas9-Alu_sgRNA包含靶向Alu的Alu_sgRNA_1～Alu_sgRNA_8、dCas9；优选地，所述复合物二dCas9-L1_sgRNA包含靶向L1的L1_sgRNA_1～L1_sgRNA_8、dCas9；更优选地，所述Alu_sgRNA_1～Alu_sgRNA_8的序列如SEQIDNO:1～8所示；更优选地，所述L1_sgRNA_1～L1_sgRNA_8的序列如SEQIDNO:9～16所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 北京博奥医学检验所有限公司 一种基于CRISPR技术降低福尔马林固定石蜡包埋样本中宿主核酸占比的方法及其试剂盒

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