申请/专利权人：浙江农林大学

申请日：2022-03-16

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN114606175B

主分类号：C12N5/04

分类号：C12N5/04;C12N15/10;C07K1/14;C07K1/34;C07K1/36

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.02#授权;2022.06.28#实质审查的生效;2022.06.10#公开

摘要：本发明公开了一种应用于多品种的柑橘细胞核提取方法，包括如下步骤：配置好所需裂解液和灭菌相关容器；将柑橘幼嫩的叶片材料迅速用液氮浸没固定，快速充分研磨，加入到裂解液中充分混匀；使用Miracloth分离细胞核与其他非核材料；离心过滤液，不同大小离心管离心参数有差异,离心整个过程中，通过处理过的宽口枪头吸打，逐步分离叶绿体等杂质，对细胞核与其他非核材料进行精细分离，最终得到所需质量和浓度的细胞核；本发明中所提供的柑橘细胞核提取方法，使用范围广，可适用于十余种柑橘品种，能够去除叶绿体污染又对细胞核破坏较低，细胞核的纯度得到提高，且提取浓度高。

主权项：1.一种应用于多品种的柑橘细胞核提取方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、配置好所需裂解液和灭菌相关容器；S2、将柑橘幼嫩的叶片材料迅速用液氮浸没固定，快速充分研磨，加入到裂解液中充分混匀；S3、使用Miracloth分离细胞核与其他非核材料；S4、离心过滤液，不同大小离心管离心参数有差异：首先，使用50mL离心管调整到高转速5000rpm以尽量增加细胞核的回收率；其次，将10mL离心管降低到中转速3000rpm以尽量分离非核材料；最后，将1.5mL离心管降低到低转速2000rpm以减少细胞核的破碎率；离心整个过程中，通过处理过的宽口枪头吸打，逐步分离叶绿体等杂质，对细胞核与其他非核材料进行精细分离，最终得到所需质量和浓度的细胞核；所述裂解液为100mLHBstock10X、1000mLHB1Xsolution、100mLTritonX-100和NIB；所述HB为1.21gTrizmabase、5.96gKCl、20mL0.5MEDTA、0.255gSpermidine和0.348gSpermine，使用双蒸水补充到100mL，调节pH至9-9.4；所述1000mLHB1Xsolution为100mL10XHB和171.2g蔗糖，使用双蒸水补充到700mL，直至完全溶解，补充到最终体积1000mL；所述100mLTritonX-100为20mLTritonX-100、10mL10XHB和17.15g蔗糖，使用双蒸水补充到60mL，直至完全溶解，补充到最终体积100mL；所述NIB为97.5mL1XHB、2.5mLTritonX-100mix和250μLβ-巯基乙醇β-mercaptoethanoL，在使用前立即加入1g聚乙烯吡咯烷酮PVP搅拌直至溶解；所述步骤S3中的Miracloth为一种孔径22－25μm的聚酯人造纤维滤布，使用时，将其放置于漏斗上，折叠成3-5层，通过重力作用过滤进50mL离心管。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江农林大学 一种应用于多品种的柑橘细胞核提取方法

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