申请/专利权人：浙江中医药大学

申请日：2022-01-28

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN115287262B

主分类号：C12N5/10

分类号：C12N5/10;C12N5/078;C12N15/867;C12N15/861;C12N15/12;A61K35/26;A61K9/50;A61K47/36;A61P17/14

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.02#授权;2022.11.22#实质审查的生效;2022.11.04#公开

摘要：本发明公开了一种胸腺类器官微球及其制备方法与应用，向加有透明质酸钠凝胶的Transwell小室内接种胸腺混合细胞，放入DMEMF12‑B27培养基孔板，37℃、5％CO2培养；所述胸腺混合细胞是由Tβ15b1基因编辑的永生化胸腺上皮细胞与胸腺细胞混合而成；在Transwell小室中加入透明质酸酶水溶液，37℃静置培养，收集沉淀并用含免疫球蛋白和海藻酸钠的PBS重悬，滴入氯化钙水溶液中，得所述胸腺类器官微球。本发明制备的胸腺类器官微球能在体外模拟胸腺微环境，具有诱导、维持T细胞定型和分化的能力，并在体内模拟正常小鼠胸腺生成，改善免疫缺陷，有效激发毛囊，使毛囊再生的生物工程策略成为可能。

主权项：1.一种胸腺类器官微球，其特征在于，所述胸腺类器官微球按如下方法制备：（1）将透明质酸钠凝胶加入Transwell小室中，加热至室温或放入37℃培养箱复温半小时使其软化覆盖小室底膜，再将Transwell小室放入加有DMEMF12-B27培养基的培养孔板中；DMEMF12-B27培养基组成为：在DMEMF12培养液中加入2%的B27，0.1%的L-抗坏血酸2-磷酸倍半镁盐水合物、1%的青霉素链霉素，1%的添加剂Glutamax，0.01%的rmFLT3L，0.01%的rmIL-7，0.1%的β巯基乙醇，体积浓度10%的胎牛血清，在培养第一周添加0.02%的rmSCF；所述L-抗坏血酸2-磷酸倍半镁盐水合物终浓度为30µM，所述青霉素链霉素终浓度为1×；所述Glutamax终浓度为1×；所述rmFLT3L终浓度5ngmL；所述rmIL-7终浓度5ngmL；所述rmSCF终浓度10ngmL；所述β巯基乙醇终浓度0.05mM；（2）向步骤（1）Transwell小室内接种胸腺混合细胞，37℃、5%CO2培养5-10天；所述胸腺混合细胞是由敲低或过表达Tβ15b1基因的永生化胸腺上皮细胞与新鲜离体的敲低或过表达Tβ15b1基因的原代胸腺细胞混合而成；（3）在步骤（2）的Transwell小室中加入透明质酸酶水溶液，37℃静置培养16h，离心，收集沉淀并用含1μgmL免疫球蛋白的PBS重悬，加入海藻酸钠，混匀，获得混合液；（4）将步骤（3）混合液滴入氯化钙水溶液中，获得所述的胸腺类器官微球。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江中医药大学 一种胸腺类器官微球及其制备方法与应用

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