申请/专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

申请日：2021-12-17

公开（公告）日：2024-04-02

公开（公告）号：CN114214390B

主分类号：C12Q1/6806

分类号：C12Q1/6806;C12Q1/6869

优先权：["20210218 CN 202110187693X"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.02#授权;2022.04.08#实质审查的生效;2022.03.22#公开

摘要：本发明属于农业技术领域，具体涉及用于高通量测序的微生物饲料添加剂的核酸提取方法。本发明用于高通量测序的微生物饲料添加剂的核酸提取方法，包括以下步骤：取样品后进行清洗；裂解样品中的微生物；去除样品中的RNA；去除样品中的蛋白质；吸附DNA，进行清洗。本发明方法提取微生物饲料添加剂得到的核酸纯度高、完整度高,可用于后续的高通量测序分析。

主权项：1.用于高通量测序的微生物饲料添加剂的核酸提取方法，其特征在于，所述方法的步骤如下：（1）取样品，用10×TE缓冲液清洗样品，10×TE缓冲液的组成为Tris-HCl、EDTA；（2）裂解样品中的微生物,步骤（1）所得样品中加入生理盐水，震荡悬起沉淀，再加入40～60mgmL溶菌酶混匀，37℃反应0.5～4.5h后，离心，弃清液，收集菌体；向收集的菌体中加入锆珠及裂解液，裂解样品中的微生物，其中，样品与裂解液的体积比为1：3～7，所述裂解液的组成为包括1～5%SDS、0.5～10×TE缓冲液及0.3～3MNaCl，裂解液的pH为7.0～9.0；加入裂解液后，进行研磨震荡，在65～75℃条件下裂解5～200min，离心，取上清液；（3）向步骤（2）所得样品中加入终浓度为1～5mgmL核糖核酸酶，在36.5～37.5℃条件下孵育5分钟-12小时，去除样品中的RNA；（4）向步骤（3）所得样品中加入终浓度1～5mgmL蛋白酶K，在65～75℃条件下孵育5分钟-2小时，去除样品中的蛋白质；（5）向步骤（4）所得样品中加入磁珠混合液，吸附细菌DNA，其中，磁珠混合液包括磁珠和PEG，磁珠与PEG的体积比为1：1～4；磁珠的终浓度为0.5～5mgmL；（6）清洗步骤（5）所得的DNA。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 用于高通量测序的微生物饲料添加剂的核酸提取方法

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