申请/专利权人：陕西师范大学

申请日：2023-12-26

公开（公告）日：2024-04-09

公开（公告）号：CN117849338A

主分类号：G01N33/569

分类号：G01N33/569;G01N33/543;G01N27/327;G01N27/30

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.26#实质审查的生效;2024.04.09#公开

摘要：本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas14a检测金黄色葡萄球菌的方法，将CRISPRCas14a的反式裂解活性引入到电化学生物传感器中，结合Zr基金属‑有机框架@金‑铂PCN‑222@AuPt纳米酶催化的信号放大，建立了一种准确、超灵敏的金黄色葡萄球菌检测方法。在优化条件下，金黄色葡萄球菌的线性检测范围为5×101～5×107CFUmL，检出限为10CFUmL。本发明可为金黄色葡萄球菌的检测提供新的电化学生物传感分析方法，可为食源性致病菌的食品现场快速检测方法的研究提供新思路，对于实用传感器件开发研究也具有一定的参考价值。

主权项：1.一种基于CRISPR-Cas14a检测乳中金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于：包括，制备MIL-101CrPPy@Au纳米复合材料悬浮液；制备PCN-222@AuPt纳米酶；将玻碳电极GCE表面抛光，将MIL-101CrPPy@Au悬浮液滴涂在抛光好的GCE表面，得到MIL-101CrPPy@AuGCE；将P-ssDNA添加到MIL-101CrPPy@AuGCE上，孵育得到P-ssDNAMIL-101CrPPy@AuGCE生物传感器；取cDNA和适配体溶液混合，加入杂交缓冲液，孵育、退火处理到室温，再次孵育得到适配体cDNA复合物；将含有金黄色葡萄球菌活菌待测物添加到适配体cDNA复合物中形成混合液，将混合液离心，取上清液加入至Cas14asgRNA复合物中，孵育获得激活的CRISPRCas14a体系；将激活的CRISPRCas14a体系添加至P-ssDNAMIL-101CrPPy@AuGCE生物传感上反应后，将PCN-222@AuPt悬浮液添加至生物传感表面，孵育后用无菌无酶水冲洗后，将所得电极浸入含有1.0mMH2O2的PBS溶液，通过DPV法测量电极的电化学信号；其中，通过控制金黄色葡萄球菌活菌的浓度，利用上述方法测量电极的电化学信号响应值，建立电流信号响应值与金黄色葡萄球菌浓度的对数值的线性关系；将待测乳预处理后，通过上述处理方法测得电极的电化学信号，代入所述线性关系中，实现乳内金黄色葡萄球菌浓度的检测。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 陕西师范大学 一种基于CRISPR-Cas14a检测乳中金黄色葡萄球菌的方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD