申请/专利权人：浙江大学绍兴研究院

申请日：2023-12-14

公开（公告）日：2024-04-09

公开（公告）号：CN117844760A

主分类号：C12N5/10

分类号：C12N5/10;C12N15/113;C12N9/22;C12N15/85;C12N15/54

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.26#实质审查的生效;2024.04.09#公开

摘要：本发明属于生物学领域，一种提高病毒滴度的细胞改造方法，根据编码蛋白激酶R的EIF2αK2基因设计其gRNA，得到位于3号外显子9374位置的gRNA‑9374，其核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，以及位于4号外显子15491位置的的gRNA‑15491，其核苷酸序列如SEQIDNo.2所示；对gRNA加上引物后插入CRISPR相关载体制备重组质粒，通过重组质粒转染细胞以及嘌呤霉素加压筛选，经测序鉴定表明获得成功敲除EIF2αK2基因的细胞。本发明通过敲除EIF2αK2基因使细胞蛋白激酶R缺失表达，使病毒复制不受蛋白激酶R限制从而提高病毒的包装效率，获得高滴度的慢病毒。

主权项：1.一种提高病毒滴度的细胞改造方法，其特征在于，根据编码蛋白激酶R的EIF2αK2基因设计其gRNA，得到位于3号外显子9374位置的gRNA-9374，其核苷酸序列如SEQIDNo.1所示，以及位于4号外显子15491位置的的gRNA-15491，其核苷酸序列如SEQIDNo.2所示；对gRNA加上引物后插入CRISPR相关载体制备重组质粒，通过重组质粒转染细胞以及嘌呤霉素加压筛选，经测序鉴定表明获得成功敲除EIF2αK2基因的细胞，细胞无法表达蛋白激酶R使病毒复制不受限制从而提高病毒的包装效率，获得高滴度的慢病毒。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江大学绍兴研究院 提高病毒滴度的细胞改造方法、gRNA、重组载体及改造细胞

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