申请/专利权人：广东工业大学

申请日：2024-01-18

公开（公告）日：2024-04-09

公开（公告）号：CN117844704A

主分类号：C12N1/20

分类号：C12N1/20;C12N5/077;A61K35/74;A61P19/08;C12R1/01

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.26#实质审查的生效;2024.04.09#公开

摘要：本发明公开了一种幽门螺旋杆菌外膜囊泡及其制备方法与应用；旨在提供一种简单、快捷且经济从幽门螺旋杆菌中分离出omv，并将其纯化的方法；其制备的外膜囊泡轮廓清晰，结构完整的幽门螺旋杆菌外膜囊泡；其可以作为幽门螺杆菌外膜囊泡作为制备抑制MC3T3‑E1细胞的成骨分化药物的应用；该方法1）幽门螺杆菌复苏，2）细菌传代；3）幽门螺杆菌的液体培养；4）幽门螺杆菌外膜囊泡的提取；5）幽门螺杆菌外膜囊泡的纯化；属于细胞生物学技术领域。

主权项：1.一种幽门螺旋杆菌外膜囊泡的制备方法，其特征在于，依次包括下述步骤：1）幽门螺杆菌复苏；2）细菌传代取步骤1）复苏后的幽门螺杆菌，灭菌冷却后挑取菌落，再次转接在新鲜配制的哥伦比亚血琼脂平板上，继续培养3天进行扩增；3）幽门螺杆菌的液体培养取步骤2）扩增后的菌体置于培养基中，培养72h后达到对数生长期，得到幽门螺杆菌细菌悬液；4）幽门螺旋杆菌外膜囊泡的提取取幽门螺杆菌细菌悬液，离心分离过滤，取滤液，将滤液再次离心分离后弃上清液，加入PBS缓冲液重悬沉淀后再次离心，弃上清液，再次加入PBS缓冲液重悬，收集沉淀得到外膜囊泡；5）幽门螺旋杆菌外膜囊泡的纯化以HEPES缓冲液作为稀释液，在超速离心管内由下往上依次加入2mL45wv%碘克沙醇，2mL42wv%碘克沙醇，2mL39wv%碘克沙醇，2mL36wv%碘克沙醇，2mL32wv%碘克沙醇，2mL28wv%碘克沙醇，2mL24wv%碘克沙醇，2mL20wv%碘克沙醇得到密度梯度离心装置，并将步骤4）收集得到的外膜囊泡加在密度梯度离心装置最上层进行离心分离，离心条件为200,000g，4°C过夜离心分离沉淀物；用PBS洗涤沉淀物三次，得到纯化后的OMVs。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 广东工业大学 幽门螺旋杆菌外膜囊泡及其制备方法与应用

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