申请/专利权人：福建农林大学

申请日：2024-01-15

公开（公告）日：2024-04-09

公开（公告）号：CN117844855A

主分类号：C12N15/82

分类号：C12N15/82;A01H6/46;A01H5/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.26#实质审查的生效;2024.04.09#公开

摘要：本发明属于生物技术领域，涉及一种快速培育转基因甘蔗的方法，尤其涉及一种利用甘蔗种茎快速获得转基因甘蔗的方法。针对现有甘蔗遗传转化周期时间久、组织培养工作量大的问题，直接利用甘蔗种茎，在超声波的作用下，通过农杆菌介导法进行甘蔗遗传转化，可快速高效地获得转基因甘蔗，比一般的农杆菌介导甘蔗遗传方法对比，转化时间可缩短50%以上，工作量减少80%以上。

主权项：1.一种利用甘蔗种茎快速获得转基因甘蔗的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1：农杆菌侵染菌液的制备；步骤2：受体材料的制备；步骤3：农杆菌介导遗传转化；步骤4：抗性筛选培养；步骤5：转基因材料鉴定；所述步骤1的具体过程为：将含有bar基因的农杆菌菌株在含50mgL卡那霉素和40mgL利福平的LB培养基平板上划线，28℃培养过夜，挑取单菌落接种到含有50mgL卡那霉素和40mgL利福平的LB液体培养基中，28℃、200rpm振荡培养至对数生长期；取处于对数生长期的菌液，放入含50mgL卡那霉素和40mgL利福平的LB液体培养基中，28℃、200rpm振荡培养至OD600值为1.0-1.5；4℃、5000rpm离心10min，弃上清，收集菌体；将菌体重悬于等体积含200μmolL乙酰丁香酮的LB液体培养基中，28℃、200rpm振荡培养1小时，得到农杆菌侵染菌液；所述步骤2的具体过程为：选取田间生长健康的伸长期甘蔗种茎，斩断为含有蔗芽的10cm长的蔗茎，清洗干净放入托盘中，使用湿润纱布覆盖后放入培养箱中，30℃暗处理1-4天，使蔗芽萌动，而后将萌动的蔗芽外层鳞片剥除，但不要破坏生长点，然后用无菌针头对每个蔗芽刺3-5次，得到受体材料；所述步骤3的具体过程为：将受体材料浸没于农杆菌侵染菌液中超声处理5min，然后转移到装有农杆菌侵染菌液的无菌玻璃容器中，用透气膜封口后将玻璃容器放入真空干燥器中给以300mmHg真空压力条件辅助农杆菌侵染4-6min；真空侵染结束后，取出玻璃容器，使受体材料继续浸没于农杆菌侵染液中，28℃、20rpm培养8h；然后取出受体材料，在无菌滤纸上控干；将被侵染的受体材料置于暗室中培养24h，温度24±2℃，保持空气湿度50%-60%；所述步骤4的具体过程为：将暗室中培养后的受体材料放在无菌玻璃容器中，用含有500mgL特美汀的无菌水清洗2-3次；将清洗后的受体材料转移到玻璃培养瓶中，使蔗芽向上，然后加入含有500mgL特美汀和5-10mgLBASTA的无菌水，将蔗茎的12-23浸泡在水中，在28±2℃条件下，每天给予14h12000Lx的光照，光暗交替培养，每三天更换一次新鲜的含有500mgL特美汀和5-10mgLBASTA的无菌水，以避免细菌生长；培养20-30天后，用修剪刀小心地将抗性植株剥离种茎，移栽到基质中，用含有5-10mgLBASTA的蒸馏水灌溉，正常盆栽管理，待长出分蘖苗后，将其彼此分离并移栽让分蘖苗生长以供进一步选择；所述步骤5的具体过程为：待移栽的分蘖苗成活后，使用2.0mgL的BASTA溶液喷洒幼苗，成活植株即为具有BASTA抗性的阳性植株，其他植株叶片逐渐枯萎直至最后死亡，取成活植株的叶片使用bar基因检测试纸条进行检测。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 福建农林大学 一种利用甘蔗种茎快速获得转基因甘蔗的方法

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