申请/专利权人:中国林业科学研究院高原林业研究所
申请日:2024-01-08
公开(公告)日:2024-04-05
公开(公告)号:CN117821446A
主分类号:C12N15/10
分类号:C12N15/10;C12Q1/6806
优先权:
专利状态码:在审-实质审查的生效
法律状态:2024.04.23#实质审查的生效;2024.04.05#公开
摘要:本发明属于分子生物学实验领域,尤其是一种高质高量云南松枝条总DNA提取方法,针对现有的DNA严重降解且杂质含量高会致使有效分子数据量捕获效率降低,严重影响科研结论的完整性和正确性的问题,现提出如下方案,其包括以下步骤:步骤一、树枝条硅胶干燥:野外采集带有芽的枝条,弃芽后剪段装入盛有硅胶的密封袋中,带回实验室室温干燥;步骤二、液氮研磨:用锋利剪刀将枝条剪碎,本发明能充分裂解释放枝条中DNA,可有效地去除多糖、酚类及松脂等杂质,使所提DNA高质高量,在DNA凝胶成像时主带明显,胶孔中无杂质沉积,超微量分光光度计检测DNA浓度和纯度高,DNA能成功进行后续的PCR扩增等分子实验。
主权项:1.一种高质高量云南松枝条总DNA提取方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤一、树枝条硅胶干燥:野外采集带有芽的枝条,弃芽后剪段装入盛有硅胶的密封袋中,带回实验室室温干燥;步骤二、液氮研磨:用锋利剪刀将枝条剪碎,在研钵中放入PVP和液氮将枝条研磨至粉末状;步骤三、木粉过筛:研磨好的木粉过100目筛后装入2.0mL灭菌离心管;步骤四、裂解释放DNA:加入裂解液,水浴对粉末状样品进行裂解释放DNA;步骤五、抽提DNA:利用苯酚、氯仿和异戊醇对经过裂解消化处理的样本进行DNA抽提;步骤六、挑取DNA:利用冰冻无水乙醇沉淀DNA时候,用灭菌枪头挑取絮状DNA至1.5mL灭菌离心管中;步骤七、洗涤DNA:用75%的乙醇清洗DNA;步骤八、溶解DNA:清洗干净的DNA室温风干后,加入灭菌ddH2O于4℃冰箱中溶解;步骤九、检测DNA:通过琼脂糖凝胶电泳直观检测DNA;通过超微量分光光度计检测DNA浓度和纯度。
全文数据:
权利要求:
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