申请/专利权人:武汉艾迪晶生物科技有限公司
申请日:2022-09-28
公开(公告)日:2024-04-05
公开(公告)号:CN117821502A
主分类号:C12N15/84
分类号:C12N15/84;A01H5/00;A01H6/46;A01H4/00
优先权:
专利状态码:在审-实质审查的生效
法律状态:2024.04.23#实质审查的生效;2024.04.05#公开
摘要:本发明公开了一种快速高效的水稻成熟胚农杆菌转化的方法及其应用,涉及水稻遗传学技术领域,本方法通过在常规的基础盐培养基的基础上对特殊组分的取舍和用量调整,制备获得了特殊的诱导培养基、共培养基、筛选培养基和分化培养基。采用这些培养基进行水稻成熟胚农杆菌转化,转化效率高,对粳稻、籼稻均可实现稳定转化,对50多种粳稻品种的转化效率可以达到50%‑70%,对60多中籼稻品种的转化效率可以达到20%‑40%。
主权项:1.一种用于快速高效的水稻成熟胚农杆菌转化的产品,其特征在于,包括诱导培养基、共培养培养基、筛选培养基、分化培养基;所述诱导培养基包括基础盐培养基,还包括蔗糖、葡萄糖和麦芽糖,以及脯氨酸0.2-1.5gL,谷氨酰胺0.5-2gL,酸水解酪蛋白0.2-1.5gL,天门冬氨酸0.2-1.5gL,Agar6gL,24-D2-4mgL,6BA0.2-1.2mgL;其中,蔗糖、葡萄糖和麦芽糖的总浓度为10-30gL,且蔗糖、葡萄糖和麦芽糖的质量比为1:1:1;所述共培养基包括基础盐培养基,还包括葡萄糖和麦芽糖,以及脯氨酸0.2-1.5gL,谷氨酰胺0.5-2gL,酸水解酪蛋白0.2-1.5gL,天门冬氨酸0.2-1.5gL,Agar7gL,24-D2-4mgL,乙酰丁香酮20-60mgL;其中,葡萄糖和麦芽糖的总浓度为5-20gL,且葡萄糖和麦芽糖的质量比为1:1;所述筛选培养基包括基础盐培养基,还包括麦芽糖和甘露醇,以及脯氨酸0.2-1.5gL,谷氨酰胺0.5-2gL,酸水解酪蛋白0.2-1.5gL,天门冬氨酸0.2-1.5gL,Agar8gL,24-D2-4mgL,KT0.2-1.5mgL,特美汀300mgL,头孢200mgL,以及真核抗生素,所述真核抗菌素及其浓度可以选择潮霉素50mgL、G418200mgL、basta15mgL中的至少一种;其中,麦芽糖的浓度为20-50gL,甘露醇的浓度为5-10gL;所述分化培养基包括基础盐培养基,还包括蔗糖20-50gL,脯氨酸0.2-1.5gL,谷氨酰胺0.5-2gL,酸水解酪蛋白0.2-1.5gL,天门冬氨酸0.2-1.5gL,Phytagel3gL,ZT2-4mgL,KT2-6mgL,NAA0.05-0.5mgL。
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