申请/专利权人：华中农业大学

申请日：2023-11-24

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN117866924A

主分类号：C12N9/22

分类号：C12N9/22;C12N9/12;C12N15/55;C12N15/54;C12N15/113

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.04.30#实质审查的生效;2024.04.12#公开

摘要：本发明公开了多sgRNA介导的EXPERTplus先导基因编辑系统及其应用。本发明为了提升EXPERT系统的编辑效率，在EXPERT系统的基础上，在ori‑sgRNA与expegRNA间增设了多条sgRNA。结果显示，EXPERTplus系统可以进一步提高编辑效率。相比于PE系统，EXPERTplus系统可编辑的范围更广，可以实现88bp的精确替换，且编辑效率更高。此外，由于开发的EXPERTplus系统仅仅只在一条链上产生切口，没有产生DNA双链断裂，相比于PE3与twinPE系统均可能会产生DNA双链断裂，其将产生更低的indels，因此更为安全。

主权项：1.一种生物体或生物细胞基因组序列的编辑方法，包括如下步骤：使生物体或生物细胞表达反转录酶、核酸内切酶、ori-sgRNA、expegRNA和m个MidsgRNA；所述expegRNA依次包括靶点序列甲、sgRNA骨架、逆转录模板序列、引物结合位点序列；所述ori-sgRNA依次包括靶点序列乙和所述sgRNA骨架；所述expegRNA的3’末端结合至所述ori-sgRNA产生切口的5’端；所述靶点序列甲与所述靶点序列乙之间的片段大小为23-100bp且存在PAM序列；每个MidsgRNA均依次包括靶点序列和所述sgRNA骨架，且其靶向区域位于所述expegRNA靶向区域和所述ori-sgRNA靶向区域之间；所述m为等于或大于1的整数；所述核酸内切酶在所述expegRNA、所述ori-sgRNA和所述MidsgRNA引导下可在靶标区域的非靶向链上产生多个DNA切口。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 华中农业大学 多sgRNA介导的EXPERTplus先导基因编辑系统及其应用

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