申请/专利权人：中国农业大学

申请日：2021-07-19

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN113564164B

主分类号：C12N15/113

分类号：C12N15/113;C12N9/22;C12N9/12;C12N15/84;C12N15/62;A01H5/00;A01H6/46

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.16#授权;2021.11.16#实质审查的生效;2021.10.29#公开

摘要：本发明公开了一种提高先导编辑效率的载体和方法。本发明公开的提高先导编辑效率的载体能转录pegRNA，该pegRNA为由靶向目的DNA片段的sgRNA、逆转录模板和引物结合位点连接得到的RNA分子，引物结合位点的3’端和或其中间与sgRNA的spacer的核苷酸不匹配。实验证明，本发明通过在PBS的中间位置引入突变碱基或者在PBS的3'端引入突变碱基可以有效提高植物中先导编辑系统的编辑效率，通过该方法得到的DNA先导编辑系统及相关载体具有很好的应用前景。

主权项：1.一种DNA先导编辑系统，含有2个转录pegRNA的DNA分子，所述pegRNA为由靶向目的DNA片段的sgRNA、逆转录模板rtT和引物结合位点PBS连接得到的RNA分子；所述pegRNA的DNA分子为序列4的第515-639位，其中，第515-534位为Spacer的序列，第535-610位为sgRNA的骨架序列，第611-639位为rtT-PBS的序列；序列4中的n为碱基a、c、t或g；所述pegRNA的DNA分子的转录由序列3的第1-994位所示的DNA分子驱动，所述pegRNA的DNA分子中引物结合位点的3’末端倒数第七个核苷酸与sgRNA的spacer的相应核苷酸不匹配；或所述pegRNA的DNA分子的转录由序列4的第1-437位所示的DNA分子和序列4的第811-1334位所示的DNA分子驱动，所述pegRNA的DNA分子中引物结合位点的3’末端的倒数一个、倒数两个、倒数三个或倒数第七个核苷酸与sgRNA的spacer的相应核苷酸不匹配；所述DNA先导编辑系统还含有Cas9切口酶H840A与逆转录酶M-MLV融合所形成的融合蛋白；所述融合蛋白的编码基因为序列1的第2006-8359位；所述DNA先导编辑系统还含有tRNA基因和RNA核酶基因，位于同一基因表达框中的tRNA基因、pegRNA基因及RNA核酶基因依次相连；所述RNA核酶基因为HDV基因。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国农业大学 一种提高先导编辑效率的载体和方法

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