申请/专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

申请日：2023-11-08

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN117214350B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.12#授权;2023.12.29#实质审查的生效;2023.12.12#公开

摘要：本公开提供一种多形态叶酸总含量的检测方法及试剂盒。具体地，检测方法，包括：对待测样品进行衍生处理，得到衍生产物；其中，所述衍生处理的溶液包括甲醛和还原剂；对所述衍生产物进行预处理，得到预处理产物；利用液相色谱法或液相色谱‑质谱法，检测得到所述预处理产物对应的多形态叶酸总含量。本公开实施例提供的总叶酸定量方法使用灵活，操作简单、对标准品的依赖度低，灵敏度高，重现性好，定量准确度高。

主权项：1.一种多形态叶酸总含量的检测方法，其特征在于，包括：对待测样品进行衍生处理，得到衍生产物；其中，所述衍生处理的溶液包括甲醛、还原剂、甲酸和甲醇、乙醇中的至少一者；其中，所述衍生处理的溶液为轻标衍生溶液；对所述衍生产物进行预处理，得到预处理产物；对多形态叶酸的标准品进行衍生处理，得到标准品衍生产物；其中，衍生处理所述标准品的甲醛和还原剂至少一者为同位素标记化合物；所述同位素标记化合物选自13C,D2-甲醛、D2-甲醛、13C-甲醛和氘代氰基硼氢化钠中的至少一者；利用液相色谱-质谱法的内标法，检测得到所述预处理产物对应的多形态叶酸总含量；其中，所述衍生处理的条件包括：温度为0~37℃，时间为30~90分钟；所述多形态叶酸的标准品为5-甲基四氢叶酸、5-甲酰四氢叶酸和10-甲酰叶酸；所述衍生产物包括式1~式3中的至少一者； 、、；其中，所述多形态叶酸包括叶酸、二氢叶酸、四氢叶酸、5-甲基四氢叶酸、5,10-亚甲基四氢叶酸、5,10-次甲基四氢叶酸、5-甲酰四氢叶酸和10-甲酰四氢叶酸及各自谷氨酸聚合物；其中，所述谷氨酸聚合物的聚合度为1-8；所述还原剂选自氰基硼氢化钠和三乙酰氧基硼氢化钠中的至少一者；所述预处理包括：将所述衍生产物和缓冲液充分混匀，离心取上清液；以及对所述上清液除杂；所述液相色谱-质谱法的色谱柱为C18柱，流动相A是加入0.1%甲酸的水，流动性B是加入0.1%甲酸的乙腈；洗脱梯度如下所示， 质谱采用选择性反应监测扫描模式。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 多形态叶酸总含量的检测方法及试剂盒

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