申请/专利权人：中国热带农业科学院热带生物技术研究所

申请日：2022-01-14

公开（公告）日：2024-04-12

公开（公告）号：CN114397349B

主分类号：G01N27/447

分类号：G01N27/447

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.12#授权;2022.05.13#实质审查的生效;2022.04.26#公开

摘要：本发明属生物技术领域，涉及一种基于琼脂糖堆叠凝胶的蛋白电泳分离方法，先配置凝胶缓冲液、电泳缓冲液，制作顶层胶盒，然后高浓度琼脂糖堆叠凝胶下层凝胶灌制、琼脂糖堆叠凝胶上层凝胶灌制，最后利用琼脂糖堆叠凝胶进行电泳分离蛋白。本发明工艺简单，操作简便，以琼脂糖配合相应的凝胶缓冲液，采用层叠的方式将高浓度的琼脂糖凝胶进行垂直堆叠，利用设定的电泳条件，能够在较高浓度条件下利用琼脂糖凝胶对蛋白进行电泳分离，提高了琼脂糖凝胶电泳在蛋白质分离中的适用范围。

主权项：1.一种基于琼脂糖堆叠凝胶的蛋白电泳分离方法，其特征在于，其步骤如下：1）、凝胶灌制前准备用Tris-Cl、NaCl配置凝胶缓冲液，浓度分别为0.25MTris-Cl、0.04～0.2%NaCl，备用；用Tris-Cl、SDS配置电泳缓冲液，浓度分别为0.25MTris-Cl、0.2～1.0%SDS，备用；顶层胶盒的制作：取长方形盒子，其长度略小于玻璃板灌胶器的内孔长度，在盒子底部平行于长边方向开设一个细缝，细缝宽度略大于玻璃板灌胶器的内孔宽度，在盒子底部的外侧于细缝两侧对称设置两条硅胶条，硅胶条之间的距离等于玻璃板灌胶器的厚度；2）、琼脂糖堆叠凝胶灌制：S1、琼脂糖堆叠凝胶下层凝胶灌制：按浓度为8～14%的琼脂糖溶液的配制标准，将凝胶缓冲液、琼脂糖混合后，在蒸汽环境中于高温、高压的条件下溶解得到澄清的8～14%琼脂糖溶胶，备用；玻璃板灌胶器和顶层胶盒于75～85℃进行预热，然后在75～85℃的环境中将玻璃板灌胶器竖向放置，把顶层胶盒安装在玻璃板灌胶器顶部，顶层胶盒底部的细缝对准玻璃板灌胶器的内孔，将温度为75～85℃的琼脂糖溶胶倒入顶层胶盒中，待溶胶流满玻璃板灌胶器的内孔后室温放置20～40min，等待溶胶凝固；所述的高温、高压是指温度为115～121℃，压力为1.6×105Pa～2.1×105Pa；S2、琼脂糖堆叠凝胶上层凝胶灌制：溶胶凝固后，用梳子由下朝上把凝胶从玻璃板灌胶器中推出2.5～3.0cm，然后对齐玻璃板灌胶器边沿切除推出的琼脂糖凝胶；将玻璃板灌胶器倒转180度，取出梳子，重新于75～85℃进行预热3～5分钟；按浓度为3～4%的琼脂糖溶液的配制标准，将凝胶缓冲液、琼脂糖混合后加热溶解得到3～4%琼脂糖溶胶，将3～4%琼脂糖溶胶从上部注入玻璃板灌胶器的内孔中，插入梳子到1.5～2cm，室温放置20～40min，等待溶胶完全凝固；3）、琼脂糖堆叠凝胶电泳分离蛋白：在电泳仪中将目标蛋白样本上样后，按9～11Vcm凝胶长度的标准用电泳缓冲液进行恒电压电泳4～5小时至溴酚蓝前沿到达凝胶底部，凝胶放入考马斯亮蓝R-250染色液中染色过夜，然后转移到脱色液中脱色4～5小时，用凝胶扫描仪扫描获得了电泳图谱，获得不同的蛋白条带。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 基于琼脂糖堆叠凝胶的蛋白电泳分离方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD