申请/专利权人：广西大学

申请日：2024-01-30

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN117887748A

主分类号：C12N15/74

分类号：C12N15/74;C12N15/52;C12N15/53;C12N15/31;C12N1/21;C12P21/00;C12N1/38;C12N15/66;C12N15/67;C12R1/01

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.04.16#公开

摘要：本发明涉及一种在乳酸菌中定点插入硒代半胱氨酸合成硒蛋白的方法及应用。乳酸菌缺乏硒蛋白合成的调控基因，不具有定点插入硒代半胱氨酸合成硒蛋白的能力。本发明采用基因工程的手段，将来源于大肠杆菌合成的硒代半胱氨酸通过插入途径SBIP整合到乳酸菌中，重组表达双功能谷胱甘肽合成酶GshF增加硒供体，实现在乳酸菌中高效定点插入硒代半胱氨酸合成硒蛋白。本发明为食品、生物与医药等领域中外源功能活性硒蛋白的表达、硒蛋白的工程化改造和生产提供一种新方法，适合于新型富硒功能乳酸菌的开发利用。

主权项：1.一种在乳酸菌中定点插入硒代半胱氨酸合成硒蛋白的方法，其特征在于：在乳酸菌中重组表达硒代半胱氨酸合成和插入途径SBIP的元件SelA、SelB、SelC、SelD，以及增加硒供体的双功能谷胱甘肽合成酶GshF，如序列表SEQIDNO.1、2、3、6所示，实现硒蛋白的高效定点插入表达，包括以下步骤：1构建含有SelA、SelB、SelC、SelD的质粒，作为在乳酸菌中表达大肠杆菌SBIP途径的载体；2构建含有GshF与目的硒蛋白基因的质粒；3通过电击转化将步骤1和2中所构建的质粒一起导入乳酸菌中，构建表达目的硒蛋白的基因重组菌株；4采用加硒和Nisin诱导表达的方式，发酵培养步骤3中基因重组菌株，合成目的硒蛋白。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 广西大学 一种在乳酸菌中定点插入硒代半胱氨酸合成硒蛋白的方法及应用

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