申请/专利权人：贵州师范大学;赤水桫椤国家级自然保护区管理局

申请日：2023-05-25

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN116724888B

主分类号：A01H4/00

分类号：A01H4/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.16#授权;2023.09.29#实质审查的生效;2023.09.12#公开

摘要：本发明公开了一种快速诱导桫椤丛生芽的方法，所述方法是先以桫椤孢子为外殖体消毒处理后进行萌发初代培养，再经过原叶体续代培养和配子体不完全培养，最后将桫椤孢子体丛生芽进行移栽。桫椤的匀浆组织再生，配子体的增殖率为100%，孢子体的分化率100%，形成大量的桫椤丛生芽。本发明实现了桫椤扩繁的高效增殖。

主权项：1.一种快速诱导桫椤丛生芽的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：（1）桫椤孢子消毒处理：取成熟的桫椤孢子用10cm×10cm的滤纸完全包裹在蒸馏水浸泡12h，用灭菌后的烧杯在超净工作台上用40mL~50mL的75%酒精完全浸泡滤纸30s，无菌水清洗滤纸3次；再用40mL~50mL的5%NaClO溶液完全浸泡滤纸4min后，无菌水清洗10次，最后打开滤纸，加入20~30mL无菌水制成无菌孢子悬浮液，即得A品；（2）萌发初代培养：将A品接种于萌发初代培养基上，培养时间为2个月，得到蝶形原叶体，即B品；培养条件为：温度为25±2℃，湿度为80±2%，光质为白光，光周期为12hd，光照强度为3000Lux；所述桫椤孢子萌发初代培养基为：18MS+0.5mgL的6-BA+0.1mgL的NAA+20gL蔗糖+10gL琼脂，使用1molL的NaOH和1molL的HCl调pH值至5.8;所述18MS的配比为大量元素:铁盐:微量元素:有机物=0.125:1:1:1;（3）原叶体续代培养：将B品接种在原叶体续代培养基中增殖为原叶体团，培养1个月，得到原叶体团，即C品；培养条件为：温度为25±2℃，湿度为80±2%，光质为白光，光周期为12hd，光照强度为3000Lux；所述原叶体续代培养基为：MS+20gL蔗糖+6gL琼脂，使用1molL的NaOH和1molL的HCl调pH值至5.8；（4）配子体不完全培养：将C品放入小型电动搅碎机里，以1000rmin的搅拌速率搅拌30s，搅碎成匀浆组织，与无菌水混合直接接种在土壤基质1上，每3天喷施无菌水一次，培养2个月后，匀浆组织再生形成配子体，配子体增殖，进一步分化形成孢子体，最后生成孢子体丛生芽，即D品；培养条件为：温度为25±2℃，湿度为80±2%，光质为白光，光周期为12hd，光照强度为3000Lux；所述土壤基质1为红壤:腐殖土:泥炭土=2:1:1；（5）桫椤孢子体丛生芽移栽：将D品分株移栽在土壤基质2，培养1个月后，移栽到大棚进行常态化管理；培养条件为：温度为25±2℃，湿度为80±2%，光质为白光，光周期为12hd，光照强度为3000Lux；所述土壤基质2为红壤:腐殖土:泥炭土=1:1:1。

全文数据：

权利要求：

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