申请/专利权人：河南农业大学

申请日：2021-11-30

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN114107526B

主分类号：C12Q1/689

分类号：C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/113;C12N15/11;C12R1/01

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.16#授权;2022.03.18#实质审查的生效;2022.03.01#公开

摘要：本发明属于病原微生物的快速检测领域，特别是指一种检测西瓜嗜酸菌（Acidovoraxcitrulli）的RPA引物对和crRNA及其试剂盒和使用方法。所述RPA引物对序列如SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示，crRNA靶标序列如SEQIDNo.3所示。本发明将采用CrisprLbCas12a核酸检测平台，针对西瓜嗜酸菌（Acidovoraxcitrulli）的基因组设计特异性检测位点，并结合荧光可视化技术，开发出适合检测此类病原菌的简易性诊断方法。同时结合RPA等温扩增技术，进一步提高灵敏度。

主权项：1.一种检测西瓜嗜酸菌的试剂盒，其特征在于：包括RPA引物对、2μLRPA扩增产物体系和50μLcrRNALbCas12a混合体系；所述RPA扩增产物体系包括RPA酶粉、29.5μL复水缓冲液、11μL无核酸酶水、280nM醋酸镁、2μL基因组DNA；crRNALbCas12a混合体系包括100nMLbCas12a、120nMcrRNA、400nMssDNAFQ-reporter、20URNase抑制剂、5μL10×NEBuffer3.1和ddH2O共50μL；所述RPA引物对序列如SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示，crRNA序列如SEQIDNo.3所示；RPA引物对中的正反引物的浓度为10μM，含量为2.5μL；FQ-reporter序列为5’-FAM-TTATT-Quencher-3’。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 河南农业大学 一种检测西瓜嗜酸菌的RPA引物对和crRNA及其试剂盒和使用方法

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