申请/专利权人：中国医学科学院医学生物学研究所

申请日：2024-01-09

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN117535211B

主分类号：C12N1/20

分类号：C12N1/20;C07K14/34;C12P21/02;C12R1/16

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.16#授权;2024.03.01#实质审查的生效;2024.02.09#公开

摘要：本发明涉及一种白喉杆菌的培养基组合及白喉类毒素的制备方法，属于微生物培养技术领域，培养基组合包括复苏培养基、传代培养基、产毒培养基以及Ⅰ号生长液、Ⅱ号生长液；白喉类毒素的制备方法包括复苏培养、传二代培养、传三代培养、产毒培养、毒素类毒化。本发明制备的培养基成分取材容易、来源清晰、追溯可靠，白喉类毒素的制备方法操作简单、生产方便，白喉类毒素的产毒量和纯度高。

主权项：1.一种白喉杆菌的培养基组合，其特征在于，包括复苏培养基、传代培养基和产毒培养基；所述复苏培养基包括混合液和小牛血清；所述混合液以水为溶剂，包括如下浓度的组分：聚蛋白胨2～20gL、牛肉浸粉1～10gL、葡萄糖2～20gL、氯化钠1～10gL；所述混合液与小牛血清的体积比为1:2～4；所述传代培养基以水为溶剂，包括如下浓度的组分：聚蛋白胨胰酶消化液720～780mLL、酵母浸粉0.1～2gL、麦芽糖1～5gL、氯化钠5～10gL、乳酸1～5mLL、十二水磷酸氢二钠1～3gL、氯化钙溶液1～10mLL、磷酸二氢钾溶液5～20mLL、Ⅰ号生长液1～10mLL、Ⅱ号生长液1～5mLL；所述产毒培养基以水为溶剂，包括如下浓度的组分：聚蛋白胨胰酶消化液720～780mLL、酵母浸粉0.1～2gL、麦芽糖1～5gL、氯化钠5～10gL、乳酸1～5mLL、十二水磷酸氢二钠1～3gL、氯化钙溶液1～10mLL、磷酸二氢钾溶液5～20mLL、小牛血清胰酶消化液40～60mLL、Ⅰ号生长液1～10mLL、Ⅱ号生长液1～5mLL；所述Ⅰ号生长液以水为溶剂，包括以下浓度的组分：L-胱氨酸50～150gL、盐酸50～150mLL；所述Ⅱ号生长液以水为溶剂，包括以下浓度的组分：硫酸镁200～250gL、β-丙氨酸1～5gL、庚二酸0.1～1gL、七水硫酸锌0.1～1gL、五水硫酸铜0.1～1gL、四水氯化锰0.1～1gL、烟酸1～5gL、盐酸20～40mLL；所述聚蛋白胨胰酶消化液以水为溶剂，包括以下浓度的组分：聚蛋白胨20～60gL、牛肉浸粉1～10gL、胰酶5～20gL、乙酸10～20mLL；所述小牛血清胰酶消化液以水为溶剂，包括以下浓度的组分：小牛血清40～60mLL、胰酶5～20gL、十二水磷酸氢二钠1～3gL、氯化钙溶液1～10mLL；所述氯化钙溶液的初始浓度为20～30wt％；所述磷酸二氢钾溶液的初始浓度为0.5～2wt％；所述乳酸的初始浓度为80～90wt％；所述盐酸的初始浓度为30～40wt％。

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