申请/专利权人：合肥工业大学

申请日：2022-07-21

公开（公告）日：2024-04-16

公开（公告）号：CN115236050B

主分类号：G01N21/64

分类号：G01N21/64;G01N21/01

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.16#授权;2022.11.11#实质审查的生效;2022.10.25#公开

摘要：本发明涉及一种基于氮硫共掺石墨烯量子点的荧光探针对鼠伤寒沙门氏菌的检测方法，属于食品安全技术领域。本发明基于夹心法策略，利用核酸适配体修饰的链霉亲和素磁珠和氮硫共掺石墨烯量子点作为磁选探针和信号探针；当待测物中含有鼠伤寒沙门氏菌时，磁选探针和信号探针同步特异性识别鼠伤寒沙门氏菌形成夹心结构，通过磁选作用使夹心结构被吸附，取上清液，测定其在423nm处的荧光强度确定鼠伤寒沙门氏菌浓度。本发明实现同步识别鼠伤寒沙门氏菌，操作简便、减小了样品基质影响、成本低、荧光特性稳定，并由于在石墨烯量子点中掺杂氮、硫元素，有效提高了石墨烯量子点的荧光量子产率，使检测灵敏度提高至11.9cfumL，具有良好的应用推广前景。

主权项：1.一种基于氮硫共掺石墨烯量子点的荧光探针对鼠伤寒沙门氏菌的检测方法，其特征在于：所用信号探针溶液是由氨基化适配体（1）修饰的氮硫共掺石墨烯量子点制成；所述氨基化适配体（1）的DNA序列为5′-NH2-CH26-TATGGCGGCGTCACCCGACGGGGACTTGACATTATGACAG-3′；所用磁选探针溶液是由生物素化适配体（2）修饰的链霉亲和素磁珠制成；所述的生物素化适配体（2）的DNA序列为5′-Biotin-GAGGAAAGTCTATAGCAGAGGAGATGTGTGAACCGAGTAA-3′；所用标准曲线：横坐标X为鼠伤寒沙门氏菌菌液浓度的对数值，纵坐标Y为I0-I，所述I0为检测空白对照溶液时在423nm处的荧光强度，所述I为检测102、103、104、105、106、107cfumL的鼠伤寒沙门氏菌溶液时在423nm处的荧光强度；具体检测操作步骤如下：（1）待检液的制备取1mL的液态乳，以8000×g离心5min，弃去上清液，用1mL浓度为0.1M、pH值7.4的无菌PBS缓冲液重悬沉淀获得待检液；（2）检测（2.1）在500μL待检液中加入100μL信号探针溶液和36μL磁选探针溶液，在37℃条件下孵育45min，得到复合溶液；（2.2）将复合溶液置于磁力架上进行磁分离，取上清液，得到待测溶液；（2.3）取上述待测溶液于石英比色皿中，设定棱光F97Pro荧光分光光度计的激发波长为349nm，测定待测溶液在423nm处的荧光强度；（3）计算检测结果将I0-I值代入到标准曲线中，计算得出待测溶液中的鼠伤寒沙门氏菌浓度，即完成检测；其中，I0为检测空白对照溶液时在423nm处的荧光强度，I为检测待测溶液时在423nm处的荧光强度；当I0-I值大于104时，表明被测物中检出鼠伤寒沙门氏菌；当I0-I值小于104时，表明被测物中未检出鼠伤寒沙门氏菌；所述信号探针溶液的制备操作步骤如下：（1）取0.1mL氮硫共掺石墨烯量子点原液加入到9.9mL的超纯水中，获得10mL的氮硫共掺石墨烯量子点水溶液；（2）向10mL的氮硫共掺石墨烯量子点水溶液中加入5mgN-羟基琥珀酰亚胺和10mg1-3-二甲氨基丙基-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，用浓度10mgmL的氢氧化钠溶液调节pH值至5.0，在室温下避光孵育30min，获得活化的氮硫共掺石墨烯量子点水溶液；（3）取上述活化的氮硫共掺石墨烯量子点水溶液，用浓度10mgmL的氢氧化钠溶液调节pH值至7.4，加入20μL浓度100μM的氨基化适配体（1）溶液，在室温下悬浮2h，获得信号探针溶液。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 合肥工业大学 一种基于氮硫共掺石墨烯量子点的荧光探针对鼠伤寒沙门氏菌的检测方法

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