申请/专利权人：成都中医药大学附属医院(四川省中医医院)

申请日：2024-03-08

公开（公告）日：2024-04-26

公开（公告）号：CN117918307A

主分类号：A01K67/0271

分类号：A01K67/0271;C12N5/10;C12N15/867;C12N15/12;A61K49/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.14#实质审查的生效;2024.04.26#公开

摘要：本发明涉及生物技术领域，具体来说是一种微生物感染肺结癌转化动物模型构建方法和应用，本发明利用cDNA过表达联合类器官培养技术，有效和快速地生成在基因组和表型水平上密切模仿肺结节恶性进展的肺结癌转化动物模型，而且能够通过定量、定时的菌液注射恰当模拟微生物的体内感染过程、能弥补传统感染微生物的肺结节造模方式不可控性、感染成功率低等建模技术瓶颈。

主权项：1.微生物感染肺结癌转化动物模型的构建方法，其特征在于，步骤包括：S01.取Trp53基因缺失小鼠肺组织，经剪切、胶原酶消化后，使用添加多种细胞因子和补充物的培养基和Matrigel基质胶作为生长支架培养；S02.将类器官从基质胶中解离，构建靶向K-ras基因特定区域的cDNA表达载体，进行K-ras质粒提取，再感染类器官；S03.利用Luciferace、qPCR鉴定验证类器官基因编辑效率，确保肺类器官Trp53、K-ras基因编辑成功；S04.将处于对数生长期的类器官进行HE和IHC染色，用于确认TK类器官的病理情况；S05.RNA-seg技术对TK类器官进行表型分析，包括细胞增殖、分化、迁移和信号传导途径的分析，以评估K-ras突变对类器官功能的影响；S06.将TK类器官悬液皮下注射到小鼠右腋下，1周后用抗生素灭活的牙龈卟啉单胞菌注射到肿瘤部位感染小鼠，每周三次；S07.术后定期监测小鼠的体重、行为和健康状况，通过IVISSpectrum成像系统观察出现肿瘤细胞荧光情况、MicroCT技术观察肺结节大小；S08.在4、6、10周，采集小鼠肺组织进行HE和IHC染色，用于评估肿瘤的生物学特性；S09.使用qPCR技术，检测瘤内牙龈卟啉单胞菌的感染情况，确证牙龈啉单胞菌在肿瘤组织内定植。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 成都中医药大学附属医院(四川省中医医院) 微生物感染肺结癌转化动物模型的构建方法和应用

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