申请/专利权人：华东理工大学

申请日：2024-01-29

公开（公告）日：2024-04-26

公开（公告）号：CN117929585A

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.14#实质审查的生效;2024.04.26#公开

摘要：本发明涉及质谱检测技术领域，具体涉及分步内标法检测干血斑中的神经递质。本发明通过干血斑采集待测样本，经打孔、稀释、复溶、分步添加内标等前处理步骤后，过程中采用和样本采集同样的方法制备干血斑标准样品和干血斑质控品，采用标准曲线法进行液相色谱质谱联用法分析。

主权项：1.分步内标法检测干血斑中的神经递质，其特征在于，通过干血斑采集待测样本，经打孔、稀释、复溶、分步添加内标等前处理步骤后，过程中采用和样本采集同样的方法制备干血斑标准样品和干血斑质控品，采用标准曲线法进行液相色谱质谱联用法分析，具体的步骤为，1血液样本的干血斑采集准备新鲜全血样品，取血样点在干血斑采集卡上，在25℃室温条件下干燥2h，干燥后得到干血斑标样，密封保存；2干血斑标准样品制备取六份2ml空白血基质，分别加入六个不同浓度水平的神经递质标准溶液，涡旋混匀后，取步骤1相同体积滴加在干血斑采集卡纸上，待液体扩散后，于25℃室温条件下干燥2h，干燥后得到干血斑标样，密封保存；3干血斑质控品制备取三份2ml空白血基质，分别加入三个不同浓度水平的神经递质标准溶液，涡旋混匀后，取步骤1相同体积滴加在干血斑采集卡纸上，待液体扩散后，于25℃室温条件下干燥2h，干燥后得到干血斑质控品，密封保存；4干血斑样本打孔打孔对象为步骤1得到的已干燥过的含血样点的干血斑采集卡，使用3～8mm打孔器打孔，获得3～8mm直径的干血斑样品片；5干血斑样本稀释干血斑样品片中加入含0.1％甲酸的甲醇、体积比1：1的甲醇-水混合液或体积比1：1的乙腈-水混合液，振荡、涡旋混匀20～60min；取上清液冷冻干燥，加入工作液复溶，在4℃14000rcf条件下低温高速离心，取上清液备用；6干血斑样本内标分步添加使用含0.1％甲酸的甲醇、体积比1：1的甲醇-水混合液或体积比1：1的乙腈-水混合液溶解待测神经递质内标物配置内标液；内标液可添加到下述三个步骤制得的样品中的两个或三个：a.在步骤1全血样品点样过程中加入内标液；b.在步骤5第一步加入工作液时添加内标液；c.在步骤4的样品片上添加内标液，添加量单个步骤5-10μL；7干血斑标准样品和干血斑质控品打孔打孔对象为步骤2中得到的已干燥过的干血斑标样和步骤3中得到的已干燥过的干血斑质控品，使用3～8mm打孔器打孔，获得3～8mm直径的干血斑标准样品片和干血斑质控品片；8干血斑标准样品和干血斑质控品稀释步骤7得到的干血斑标样中加入含0.1％甲酸的甲醇、体积比1：1的甲醇-水混合液或体积比1：1的乙腈-水混合液，振荡、涡旋混匀20～60min；取上清液冷冻干燥，加入工作液复溶，在4℃14000rcf条件下低温高速离心，取上清液备用；步骤7得到的干血斑质控品中加入含0.1％甲酸的甲醇、体积比1：1的甲醇-水混合液或体积比1：1的乙腈-水混合液，振荡、涡旋混匀20～60min；取上清液冷冻干燥，加入工作液复溶，在4℃14000rcf条件下低温高速离心，取上清液备用；9干血斑标准样品和干血斑质控品内标添加使用含0.1％甲酸的甲醇、体积比1：1的甲醇-水混合液或体积比1：1的乙腈-水混合液溶解待测神经递质内标物配置内标液；干血斑标准样品和干血斑质控品内标分步添加，内标液可添加到下述三个步骤制得的样品中的两个或三个：a.在步骤1全血样品点样过程中加入内标液；b.在步骤5第一步加入工作液时添加内标液；c.在步骤4的样品片上添加内标液，添加量单个步骤5-10μL；10液相色谱串联质谱上机分析：a.取步骤4制得的干血斑样品片、步骤7制得的干血斑标样样品片和步骤8制得的干血斑质控品样品片上清液进行液相色谱分离；b.质谱分析，多反应监测模式MRM检测待测离子对。

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