申请/专利权人：广西壮族自治区农业科学院

申请日：2021-10-28

公开（公告）日：2024-04-26

公开（公告）号：CN114231602B

主分类号：C12Q1/6851

分类号：C12Q1/6851;C12N15/11;G16B5/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.26#授权;2022.04.12#实质审查的生效;2022.03.25#公开

摘要：本发明公开了一种基于qRT‑PCR检测方法快速测算桃品种需冷量的方法，属于植物基因检测技术领域。本发明方法技术步骤如下：一PpDAM5基因相对表达量的检测；二PpDAM5基因相对表达量与需冷量的等级划分；三待测桃品种的快速测算。本发明方法以已确定需冷量品种作为标准物，选取桃品种落叶时叶片进行PpDAM5基因的表达量测定，建立需冷等级划分模型，将需冷量待测的桃树新品种进行PpDAM5基因相对表达量的检测，然后根据建立的需冷等级划分模型进行匹配，可以初步快速测算待测桃品种的需冷量。本发明的测算方法操作简单、省时省力、效率高，对于快速判断引进桃品种的需冷量具有很强的实用性，且对于今后桃品种的育种中进行需冷量快速筛选也提供了较为高效的方法。

主权项：1.一种基于qRT-PCR检测方法快速测算桃品种需冷量的方法，其特征在于，包括以下步骤：（一）PpDAM5基因相对表达量的检测：（1）RNA提取：取已知需冷量的桃品种的落叶时期的未落叶片，提取RNA；所述已知需冷量的桃品种为秋蜜桃1号、鹰嘴蜜桃、霞脆、银河、金霞油蟠、紫金红2号、金霞早油蟠、霞晖5号和霞晖8号中的任一种；（2）反转录cDNA合成：将提取得的RNA反转录合成第一链cDNA；（3）qRT-PCR检测：以合成的cDNA为模板，分别以内参基因Actin基因和目的基因PpDAM5基因的引物对作为引物进行qRT-PCR扩增，绘制扩增溶解曲线，获得内参基因Actin基因和目的基因PpDAM5基因的表达量，计算获得目的基因PpDAM5基因的相对表达量；所述目的基因PpDAM5基因的上、下游引物分别为PpDAM5-F和PpDAM5-R；PpDAM5-F和PpDAM5-R引物序列分别为： PpDAM5-F：5’-ATCTCCACCACCTGCAACAGT-3’； PpDAM5-R：5’-CTTCTTAACGCCCCAGTTTGAG-3’；所述内参基因Actin基因的上、下游引物分别为Actin-F和Actin-R；Actin-F和Actin-R引物序列分别为： Actin-F：5’-CAGATCATGTTTGAGACCTTCAATGT-3’； Actin-R：5’-CATCACCAGAGTCCAGCACAAT-3’；（二）PpDAM5基因相对表达量与需冷量的等级划分：将步骤（一）中获得的已知需冷量的桃品种叶片的PpDAM5基因相对表达量与其需冷量建立需冷等级划分模型，如下： PpDAM5基因相对表达量需冷量（h）需冷等级相对表达量≤1.5需冷量≤50一级1.5＜相对表达量≤4.550＜需冷量≤150二级4.5＜相对表达量≤8.5150＜需冷量≤400三级8.5＜相对表达量≤13.0400＜需冷量≤500四级13.0＜相对表达量≤16.0500＜需冷量≤600五级16.0＜相对表达量≤21.0600＜需冷量≤750六级相对表达量21.0需冷量750七级（三）待测桃品种的快速测算：将需冷量待测的桃树新品种进行步骤（一）PpDAM5基因相对表达量的检测，然后根据步骤（二）建立的需冷等级划分模型进行匹配，初步快速测算待测桃品种的需冷量。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 广西壮族自治区农业科学院 一种基于qRT-PCR检测方法快速测算桃品种需冷量的方法

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