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【发明授权】一种精氨酸荧光探针及其制备方法和应用_华东理工大学_202010098995.5 

申请/专利权人:华东理工大学

申请日:2020-02-18

公开(公告)日:2024-05-03

公开(公告)号:CN113336854B

主分类号:C07K19/00

分类号:C07K19/00;C07K14/255;C12N15/31;G01N33/68

优先权:

专利状态码:有效-授权

法律状态:2024.05.03#授权;2021.09.21#实质审查的生效;2021.09.03#公开

摘要:本发明提供了一种精氨酸荧光探针,包括对精氨酸响应的多肽B和对精氨酸进行表现的荧光蛋白A;所述的荧光蛋白A插入到多肽B中,将B分为B1和B2两个上下结构部分,形成B1‑A‑B2式的探针结构;同样在不同位置的截短和定点突变的优化突变体,所述多肽B和精氨酸特异性结合导致荧光蛋白A荧光信号改变;所述多肽B为精氨酸结合蛋白及其突变体。本发明提供的精氨酸荧光探针蛋白分子量相对较小且易于表达,荧光动态变化大,特异性好,并且能够通过基因操作在细胞的不同亚细胞器内表达,可在细胞内外高通量、定量检测精氨酸。

主权项:1.一种光学探针,包含精氨酸敏感多肽和光学活性多肽,其中光学活性多肽位于精氨酸敏感多肽的序列内,所述精氨酸敏感多肽如SEQIDNO:1所示,所述光学活性多肽选自以下任一种:cpYFP、cpGFP、cpBFP或cpmApple,其中,所述光学活性多肽是cpYFP,其位于精氨酸敏感多肽的选自以下一个或多个位点:103104,104108,104109,104110,104111,105106,105107,105108,105110,105111,106108,106109,107108,107109,107110,107111,108111,109110,110111,197199,197200,197201,197202,197203,197204,197205,198201,198202,198203,199200,199201,199202,199203,199204,199205,199206,200203,200204,200205,200206,201202,201203,201204,201205,201206,202203,202204,202205,202206,203204,203205,203206,203207,204205,204206,204207,205206,206207,207208或208209;所述光学活性多肽是cpGFP,其位于精氨酸敏感多肽的选自以下一个或多个位点:103104,104108,104109,104110,104111,105106,105107,105108,105110,105111,106108,106109,107108,107109,107110,108111,110111,197199,197200,197201,197202,197203,197204,198201,198202,198203,199200,199201,199202,199204,199205,199206,200202,200204,200205,200206,201202,201203,201204,201205,201206,202203,202204,202205,202206,203205,203206,203207,204205,204206或205206;所述光学活性多肽是cpBFP,其位于精氨酸敏感多肽的选自以下一个或多个位点:103104,104108,104109,104110,104111,105106,105107,105108,105110,105111,106108,106109,107109,107110,107111,108111,110111,197199,197201,197203,197204,198201,198202,198203,199200,199201,199202,199203,199204,199205,200203,200204,200205,200206,201202,201203,201204,201205,201206,202203,202204,202205,202206,203205,203206,203207,204205,204206,205206,206207或207208;或所述光学活性多肽是cpBFP,其位于精氨酸敏感多肽的选自以下一个或多个位点:103104,104108,104109,104110,104111,105106,105107,105108,105110,105111,106108,106109,107108,107109,107110,107111,108111,109110,110111,197199,197201,197203,197204,197205,198201,198202,198203,199200,199201,199202,199203,199204,199205,199206,200203,200204,200205,200206,201202,201203,201204,201205,201206,202203,202205,202206,203204,203206,203207,204205,204206,205206,206207或207208。

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