申请/专利权人：安徽瑞思威尔科技有限公司

申请日：2018-05-23

公开（公告）日：2018-10-23

公开（公告）号：CN108693287A

主分类号：G01N30/88(2006.01)I

分类号：G01N30/88(2006.01)I;G01N30/06(2006.01)I

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2019.10.08#授权;2018.11.16#实质审查的生效;2018.10.23#公开

摘要：本发明公开了一种ABTS‑顶空固相微萃取气质联用法检测白酒中抗氧化成分的方法，首先将自由基2'‑联氨‑双‑3‑乙基苯并噻唑啉‑6‑磺酸ABTS与白酒避光反应，得到反应后白酒；分别将未反应白酒与反应后白酒采用顶空固相微萃取法进样，用气质联用仪检测，然后得到白酒的色谱图与反应后白酒的色谱图；最后，比较所述白酒的色谱图与所述反应后白酒的色谱图中相同保留时间峰的峰面积；反应后白酒的色谱图中峰面积减少的峰对应的成分，即为白酒中参与自由基清除作用的成分。本发明具有操作简单方便、影响因素少、灵敏度高、精密度高、稳定性好等特点，可以实现对白酒中挥发性成分抗氧化能力的评价。

主权项：1.一种ABTS‑顶空固相微萃取气质联用法检测白酒中抗氧化成分的方法，其特征在于包括如下步骤：步骤1：将ABTS工作液与待测白酒试样按2:1～10:1的体积比混匀，15～30℃下避光反应3～8h，得到反应后白酒；步骤2：将纯水与待测白酒试样按2:1～10:1的体积比混匀，在15～30℃下避光3～8h，得到白酒对比样；步骤3：分别将反应后白酒与白酒对比样用顶空固相微萃取法进样，用气质联用仪检测，得到反应后白酒的色谱图与白酒对比样的色谱图；比较反应后白酒的色谱图与白酒对比样的色谱图相应的各个峰的峰面积，峰面积减少的峰对应的物质，即为白酒中具有抗氧化作用的成分，同时根据峰面积减少的百分比比较白酒中不同抗氧化成分抗氧化能力的强弱。

全文数据：一种检测白酒中抗氧化成分的方法技术领域本发明涉及一种白酒抗氧化成分的检测方法，尤其涉及一种ABTS-顶空固相微萃取气质联用法检测白酒中抗氧化成分的方法。背景技术白酒是以粮谷为主要原料，以大曲、小曲或麸曲及酒母等为糖化发酵剂，经蒸煮、糖化、发酵、蒸馏而制成的饮料。白酒有活血通脉、助药力、增进食欲、消除疲劳，陶冶情操，使人轻快并有御寒提神的功能，对人体健康具有一定的促进作用，是中华民族的传统发酵食品，具有物质与精神双重属性。白酒中含有萜烯类、四甲基吡嗪类及酚类等生物活性物质，具有一定的抗氧化作用。随着人们对饮酒与健康关系关注度的增加，对白酒抗氧化性的研究不断增多，但是目前白酒抗氧化方法多采用分光光度法且多要求操作过程避光，稳定性不好，而且检测结果不能对白酒抗氧化成分进行系统全面的分析及归类。白酒抗氧化成分还没有系统、完整的检测方法，不利于白酒抗氧化研究的推进。发明内容为了避免上述现有技术的不足，本发明旨在提供一种ABTS-顶空固相微萃取气质联用法检测白酒中抗氧化成分的方法。本方法只需比较色谱图对应峰的峰面积的变化即可判断某成分是否具有抗氧化作用，同时根据峰面积变化幅度可比较不同成分抗氧化能力的强弱，具有操作简便、灵敏度精密度高而且稳定性好的特点。本发明ABTS-顶空固相微萃取气质联用法检测白酒中抗氧化成分的方法，包括如下步骤：步骤1：将ABTS工作液与待测白酒试样按2:1～10:1的体积比混匀，15～30℃下避光反应3～8h，得到反应后白酒；步骤2：将纯水与待测白酒试样按2:1～10:1的体积比混匀，在15～30℃下避光3～8h，得到白酒对比样；步骤3：分别将反应后白酒与白酒对比样用顶空固相微萃取法进样，用气质联用仪检测，得到反应后白酒的色谱图与白酒对比样的色谱图；比较反应后白酒的色谱图与白酒对比样的色谱图相应的各个峰的峰面积，峰面积减少的峰对应的物质，即为白酒中具有抗氧化作用的成分，同时根据峰面积减少的百分比比较白酒中不同抗氧化成分抗氧化能力的强弱。步骤1中，所述ABTS工作液在734nm处吸光度为0.7～2.0，其配制方法如下：将7mM的ABTS储备液与2.45mM的过硫酸钾储备液等体积混合，15～30℃下避光反应10～20h，即得ABTS工作母液；取2～3mL所述ABTS工作母液稀释至10～30mL，15～30℃下避光反应30min，即得ABTS工作液。其中ABTS储备液是将0.192gABTS用纯水定容至50mL后获得。其中过硫酸钾储备液是将0.066g过硫酸钾用纯水定容至100mL后获得。步骤3中，顶空固相微萃取气质联用的检测参数设置如下：色谱柱为DB-wax毛细管柱色谱柱，进样口温度为250℃，质谱检测器温度230℃，初始柱温40℃，保持2min，以6℃min升至190℃，保持2min，以6℃min升至230℃，保持15min；纯度≥99.999％的氦气载气，流速为1.6mLmin；不分流进样。与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：本发明采用顶空固相微萃取气质联用的检测方法测定白酒中抗氧化成分，白酒中呈香、呈味及功能性成分占酒体总量的1％-2％，含量相对较少，不易检测，传统分光光度法只能间接检测并通过计算得知酒样中的总抗氧化能力，不能得知是哪种成分在发挥作用；而本发明可直接快速的检测酒样的抗氧化成分，并可根据峰面积变化的幅度直接看出具体的某单一成分抗氧化能力的大小，为白酒健康性研究提供方法。ABTS工作液中含有蓝绿色自由基ABTS+·，避光操作对光度法检测抗氧化能力的精准性非常重要；本发明采用顶空固相微萃取气质联用的方法检测，其原理：白酒与ABTS+·自由基反应后其中的多种抗氧化成分会减少，通过对比白酒与反应后白酒成分的差异即可得知白酒中抗氧化成分的种类及其抗氧化能力的大小，本发明的方法是直接检测白酒中成分的变化，所以对避光的要求不是十分苛刻，放宽了操作条件，提高了试验的精准度。由于本发明采用顶空固相微萃取气质联用的方法检测白酒的抗氧化成分，该法具有操作简便、灵敏度精密度高而且稳定性好的特点，因此适宜检测白酒中含量较低的成分，进而实现对白酒进行健康功能的有效评价。由于本发明采用顶空固相微萃取气质联用的方法检测白酒中抗氧化成分，该法只需比较色谱图对应峰的峰面积的变化即可判断某成分是否具有抗氧化作用，同时根据峰面积变化百分比比较不同成分抗氧化能力的强弱。如图1为未加入ABTS工作液的白酒色谱图红色和加入ABTS工作液的反应后白酒色谱图黑色。比较色谱图中各个峰的峰面积，峰A、B、C、D、E的峰面积减少，说明白酒中成分A、B、C、D、E具有抗氧化性，比较峰面积减少的百分比，可知所述成分的抗氧化能力大小依次为ECBAD。传统检测白酒抗氧化成分的方法需先筛查白酒的成分，然后再逐一验证每一成分的自由基清除能力及抗氧化能力，传统方法存在工作量大、试验时间不同步、每次试验环境条件存在差异等问题，本发明很好的解决了以上问题。附图说明图1、图2分别为实施例1、2检测所得色谱图，其中红色峰为未加入ABTS工作液的色谱图；黑色峰为加入ABTS工作液的色谱图。从图中可以看出，加入ABTS工作液后，酒样多种成分的含量明显降低，即含量降低的成分参与了抗氧化反应，且可知不同成分抗氧化能力不同。具体实施方式下面结合附图和具体的实施例对本发明技术方案作进一步分析说明。以下实施例中所述ABTS工作液在734nm处吸光度为0.7～2.0，其配制方法如下：将7mM的ABTS储备液与2.45mM的过硫酸钾储备液等体积混合，15～30℃下避光反应10～20h，即得ABTS工作母液；取2～3mL所述ABTS工作母液稀释至10～30mL，15～30℃下避光反应30min，即得ABTS工作液。其中ABTS储备液是将0.192gABTS用纯水定容至50mL后获得；过硫酸钾储备液是将0.066g过硫酸钾用纯水定容至100mL后获得。实施例1：本实施例中ABTS-顶空固相微萃取气质联用法检测白酒中抗氧化成分的方法如下：1、将在734nm处吸光度为1.3的ABTS工作液与待测白酒按2.5:1的体积比混匀，20℃下避光反应4h，得到反应后白酒；2、将纯水与待测白酒按2.5:1的体积比混匀，在20℃下避光4h，得到白酒对比样；3、分别将反应后白酒与白酒对比样用顶空固相微萃取法进样，用气质联用仪检测，得到反应后白酒的色谱图与白酒对比样的色谱图；比较反应后白酒的色谱图与白酒对比样的色谱图相应的各个峰的峰面积，峰面积减少的峰对应的物质，即为白酒中具有抗氧化作用的成分，同时根据峰面积减少的幅度可比较白酒中不同抗氧化成分抗氧化能力的强弱。步骤3中，顶空固相微萃取气质联用的检测参数设置如下：色谱柱为DB-wax毛细管柱色谱柱，进样口温度为250℃，质谱检测器温度230℃，初始柱温40℃，保持2min，以6℃min升至190℃，保持2min，以6℃min升至230℃，保持15min；纯度≥99.999％的氦气载气，流速为1.6mLmin；不分流进样。检测结果见图1，从图1可知白酒中成分A、B、C、D、E具有抗氧化性，比较峰面积减少的百分比，可知所述成分的抗氧化能力大小依次为ECBAD。实施例2：本实施例中ABTS-顶空固相微萃取气质联用法检测白酒中抗氧化成分的方法如下：1、将在734nm处吸光度为1.8的ABTS工作液与待测白酒按3:1的体积比混匀，22℃下避光反应5h，得到反应后白酒；2、将纯水与待测白酒按3:1的体积比混匀，在22℃下避光5h，得到白酒对比样；3、分别将反应后白酒与白酒对比样用顶空固相微萃取法进样，用气质联用仪检测，得到反应后白酒的色谱图与白酒对比样的色谱图；比较反应后白酒的色谱图与白酒对比样的色谱图相应的各个峰的峰面积，峰面积减少的峰对应的物质，即为白酒中具有抗氧化作用的成分，同时根据峰面积减少的幅度可比较白酒中不同抗氧化成分抗氧化能力的强弱。步骤3中，顶空固相微萃取气质联用的检测参数设置如下：色谱柱为DB-wax毛细管柱色谱柱，进样口温度为250℃，质谱检测器温度230℃，初始柱温40℃，保持2min，以6℃min升至190℃，保持2min，以6℃min升至230℃，保持15min；纯度≥99.999％的氦气载气，流速为1.6mLmin；不分流进样。检测结果见图2，从图2可知白酒中成分A、B、C、D、E具有抗氧化性，比较峰面积减少的百分比，可知所述成分的抗氧化能力大小依次为ECBAD。

权利要求：1.一种ABTS-顶空固相微萃取气质联用法检测白酒中抗氧化成分的方法，其特征在于包括如下步骤：步骤1：将ABTS工作液与待测白酒试样按2:1～10:1的体积比混匀，15～30℃下避光反应3～8h，得到反应后白酒；步骤2：将纯水与待测白酒试样按2:1～10:1的体积比混匀，在15～30℃下避光3～8h，得到白酒对比样；步骤3：分别将反应后白酒与白酒对比样用顶空固相微萃取法进样，用气质联用仪检测，得到反应后白酒的色谱图与白酒对比样的色谱图；比较反应后白酒的色谱图与白酒对比样的色谱图相应的各个峰的峰面积，峰面积减少的峰对应的物质，即为白酒中具有抗氧化作用的成分，同时根据峰面积减少的百分比比较白酒中不同抗氧化成分抗氧化能力的强弱；所述ABTS工作液的配制方法如下：将7mM的ABTS储备液与2.45mM的过硫酸钾储备液等体积混合，15～30℃下避光反应10～20h，即得ABTS工作母液；取2～3mL所述ABTS工作母液稀释至10～30mL，15～30℃下避光反应30min，即得ABTS工作液；步骤3中，顶空固相微萃取气质联用的检测参数设置如下：色谱柱为DB-wax毛细管柱色谱柱，进样口温度为250℃，质谱检测器温度230℃，初始柱温40℃，保持2min，以6℃min升至190℃，保持2min，以6℃min升至230℃，保持15min；纯度≥99.999％的氦气载气，流速为1.6mLmin；不分流进样。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1中，所述ABTS工作液在734nm处吸光度为0.7～2.0。

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