申请/专利权人：鲁东大学

申请日：2019-10-30

公开（公告）日：2020-02-04

公开（公告）号：CN110527732B

主分类号：C12Q1/6888(20180101)

分类号：C12Q1/6888(20180101);C12Q1/686(20180101);C12N15/11(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2020.02.04#授权;2019.12.27#实质审查的生效;2019.12.03#公开

摘要：本发明公开了一种利用四角蛤蜊DMRT基因检测海洋中PBDEs的方法，包括步骤：一、在取样点取雄性四角蛤蜊成体，提取性腺RNA并反转录合成cDNA；二、对任一四角蛤蜊样品的DMRT基因和GAPDH基因进行扩增并绘制溶解曲线；三、检测SYBRGreen在PCR反应过程中荧光信号的变化得到每个PCR反应的Ct值，以GAPDH基因为内参，采用2−△△CT法分析结果，计算出DMRT基因的相对表达量（DMRT基因的相对表达量与PBDEs浓度显著负相关）。本发明检出限更低，方法更加灵敏，更环保，检测成本更低，检测时间更短，重复性好，可信度高，且四角蛤蜊采样便利，实现了PBDEs污染的更早期预警。

主权项：1.利用四角蛤蜊DMRT基因检测海洋中PBDEs的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：在待测海水或海洋沉积物的取样点取雄性四角蛤蜊成体，提取性腺RNA，以该性腺RNA为模板反转录合成cDNA；步骤二：对于任意一个四角蛤蜊样品，对其DMRT基因和GAPDH基因按照如下反应体系分别进行扩增：cDNA1μL、实时定量PCR反应混合液10μL、正向引物0.4μL、反向引物0.4μL、水8.2μL；其中，用于检测四角蛤蜊DMRT基因的引物的序列信息如下：正向引物DF：GTTCTGCTGCGGACAGGTAT反向引物DR：TAAGACGCCCATCTCACG用于检测四角蛤蜊GAPDH基因的引物的序列信息如下：正向引物GF：CGTATTGGTCGTCTTGTTGTTAG反向引物GR：TTAGCAGGGTCTTTCTCGTTAT扩增结束后绘制溶解曲线；步骤三：通过检测SYBRGreen在PCR反应过程中荧光信号的变化，得到每个PCR反应的Ct值，然后以GAPDH基因为内参，采用2−△△CT法对结果进行分析，计算出DMRT基因的相对表达量，DMRT基因的相对表达量与PBDEs的浓度呈现显著负相关，测定DMRT基因的相对表达量就可以反映海水或海洋沉积物被PBDEs污染的状况。

全文数据：

权利要求：

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