申请/专利权人：广西大学

申请日：2020-07-07

公开（公告）日：2020-10-23

公开（公告）号：CN111808912A

主分类号：C12Q1/18(20060101)

分类号：C12Q1/18(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2022.11.08#授权;2020.11.10#实质审查的生效;2020.10.23#公开

摘要：本发明涉及植物病理学技术，具体是公开了一种采用凹玻片制备25μl的琼脂培养基微载体，在微载体上载入药物样品以及病原菌孢子，检测药物对孢子萌发的抑制作用，测定方法的步骤如下：1制备合格的微载体；2将待测样品载入微载体；3滴入病原菌孢子；4孢子萌发培养；5结果观测。本发明的优点：1可在一个平皿上测试多个样品，实现测试体系小型化；2一个测试单元只消耗样品液10μl，实现检测样本微量化。

主权项：1.一种微载体检测抑制物的测定方法，其特征在于，利用凹玻片制备25μl的琼脂培养基微载体，在微载体上载入药物样品以及病原菌孢子，检测药物对孢子萌发的抑制作用，测定方法的步骤如下：1制备合格的微载体①凹玻片的灭菌：将洁净的凹玻片进行高温灭菌后备用；②凹玻片的摆置：预先准备能容纳保湿材料和凹玻片的保湿器具，在无菌工作台上打开保湿器具的盖子，将操作①的灭菌凹玻片平稳摆置于保湿材料面上；③琼脂培养基的熔化：取病原菌孢子萌发适用的三角瓶装盛的琼脂培养基加热熔化；④培养基的80℃处置：预先将普通水浴锅加热恒温到80℃，将操作③熔化的培养基放入该水浴锅中，平衡至80℃；⑤移液枪无泡移液的处置：把操作④平衡至80℃的培养基转入无菌工作台，把移液枪取液量调到25μl，将枪头伸入80℃的培养基中反复吸排培养基，直至排液操作不出现气泡现象；⑥微载体的滴注：操作⑤无气泡现象后，过量按下移液枪吸取培养基，移起枪头并靠贴在三角瓶瓶口壁上脱除枪头外部粘附的培养基，再转移并滴注25μl到凹玻片的凹穴底部，培养基液滴在凹穴内扩展平衡后，形成一个25μl的微小块，该微小块没有气泡、表面平整，成为测试使用的合格微载体；连贯操作直至凹玻片全部滴注完毕；2将待测样品载入微载体将已配备的待检测的药物样品液及测试对照处理样品液，转至无菌工作台，用移液枪吸取样品液10μl，在枪头不触及微载体面的情况下点放于步骤1制备的合格微载体表面的中部，让其自动在微载体面上扩展分散，静置至观察不到药物样品液即成为载药微载体；3滴入病原菌孢子无菌条件下，将已备好的病原菌孢子液充分悬浮均匀，用移液枪吸取孢子液1μl，在枪头不触及微载体面的情况下点放于步骤2配成的载药微载体的中部，让孢子液自然分散；4孢子萌发培养步骤3操作完毕后，盖上保湿器具的盖子，保持器具平稳状态，转移到培养箱中恒温培养，直至空白对照处理的孢子充分萌发；5结果观测从培养箱中取出步骤4的培养材料，打开保湿器具的盖子，将载着微载体的凹玻片置于显微镜下，观察和记录各个微载体上孢子的萌发情况；根据对照处理的数据，计算所测定药物对孢子萌发的抑制作用。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 广西大学 一种微载体检测抑制物的测定方法

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