申请/专利权人：路春光

申请日：2019-05-04

公开（公告）日：2020-11-06

公开（公告）号：CN111893094A

主分类号：C12N5/0783(20100101)

分类号：C12N5/0783(20100101);A61K35/17(20150101);A61P35/00(20060101);A61P31/12(20060101);A61P31/06(20060101);A61P31/18(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的视为撤回

法律状态：2024.02.20#发明专利申请公布后的视为撤回;2020.11.24#实质审查的生效;2020.11.06#公开

摘要：本发明涉及免疫细胞靶向治疗技术领域，特别涉及一种优化的从新鲜或低温冻存的人体外周血单个核细胞或脐血单个核细胞中分离纯化T细胞，T细胞诱导扩增干细胞样记忆性T细胞（TSCM）的试剂盒及产品质量控制鉴定的试剂盒体系和应用，TSCM具有更强的增殖、自我更新和存活能力，能分化成中央记忆性T细胞（TCM），效应记忆性T细胞（TEM）和效应T细胞，小鼠动物实验表明，TSCM和其他分化的T细胞亚群相比，在体内有更强的抗肿瘤效应。在临床应用中，TSCM细胞培养过程中采用的试剂较多，细胞质量标准难以控制，很难在短时间内培养出质量均一的TSCM细胞，迫切需要开发简单、格式化的试剂盒，对临床应用具有重要的意义。

主权项：1.一种临床用TSCM诱导培养和质量控制鉴定的试剂盒体系，其特征在于，包含从新鲜或低温冻存的人体外周血单个核细胞或脐血单个核细胞中分离纯化T细胞，T细胞诱导扩增干细胞样记忆性T细胞（TSCM）的试剂盒及产品质量控制鉴定的试剂盒体系和应用：（1）TSCM诱导培养试剂盒，包括容器和装入容器中的临床用TSCM细胞无血清扩增完全培养液TSCM-I和TSCM细胞扩增包被液TSCM-II和诱导因子组合物TSCM-III：本发明提供一种临床用无血清TSCM细胞诱导扩增完全培养液TSCM-I，含有人体细胞生长必须的碳水化合物、促生长因子和激素、维生素、人血白蛋白、氨基酸、无机盐离子、微量元素、水、人白介素7、人白介素21和人白介素15；本发明不排除可以采用上述无血清完全培养基之外的培养基实施培养；本发明提供一种TSCM细胞扩增包被液TSCM-II，它含有重组人纤维蛋白片段和PBS，重组人纤维蛋白片段的工作浓度为12.5ugml-50ugml；（2）本发明提供一种TSCM细胞诱导因子组合物TSCM-III，无血清TSCM细胞扩增完全培养液TSCM-I中添加50-200ngmLCD3单抗、50-200ngmLCD28单抗、5-30ngmL人白介素7、5-30ngmL人白介素15和5-30ngmL人白介素21；优选步骤（2）中T细胞按照细胞密度1×106mL用TSCM-III重悬，其中添加8ngmLIL-7、8ngmL人白介素15、8ngmLIL-7、80ngmLCD3单抗、80ngmLCD28，第二天以后用TSCM-I培养液对T细胞细胞进行诱导扩增培养，经过14-22天的扩增培养，收获达到临床应用标准的TSCM细胞；对收获的TSCM细胞制剂进行内毒素、活性和表型检测，细胞鉴定结果表明，细胞活性达到95%以上，同时含有较高比例的CD62L+PE-cy7CD45RO-Percp-Cy5.5CD45RA+FITCCD95+PETSCM细胞；TSCM在体外活化过程中会获得CD45RO+的表达，同时保留CD45RA和CD62L的表达，这可能与CD3和CD28活化过程中下调CD45RA和CD62L的表达有关，这群细胞称为TSCM-like，二者抗肿瘤效率相同；（3）本发明另一方面还提供一种TSCM诱导后鉴定试剂盒，所述临床用TSCM细胞流式表型和活性鉴定试剂盒包括五组双色抗体组合物，分别是CD3-BV421CD4-APC-CyCD8APCCD62L+PE-cy7CD45RO-Percp-Cy5.5CD45RA+FITCCD95+PE和Annexin-FINKTCPI，洗涤液50ml一管，固定液50ml一管；所述抗体按照体积1:1混合装于1支棕色EP管中，每20ul可检测一次，共计10-50套，所述洗涤液是磷酸盐缓冲液，所述固定液是1%多聚甲醛；（4）本发明还包括将上述TSCM细胞诱导试剂盒、无血清TSCM细胞扩增完全培养液TSCM-I和TSCM细胞扩增包被液体TSCM-II和TSCM-III装入专用洁净容器制备成试剂盒。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 路春光 临床用TSCM诱导培养和质量控制鉴定试剂盒及应用

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