申请/专利权人：四川省中医药科学院;成都中医药大学

申请日：2020-12-14

公开（公告）日：2022-06-03

公开（公告）号：CN112586352B

主分类号：A01H4/00

分类号：A01H4/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2022.06.03#授权;2021.04.23#实质审查的生效;2021.04.02#公开

摘要：本发明提供了一种以太白贝母鳞茎为外植体的组织培养方法，解决了现有技术中太白贝母人工种植产业种源供应困难，生产周期长，生产成本高，导致太白贝母人工繁育技术不能大力发展，不能满足市场供应的技术问题。该方法以3‑4年生的太白贝母鳞茎作为外植体，通过外植体表面灭菌、初代培养、增殖培养、诱芽培养、生根培养步骤，最终建立了太白贝母的组培快繁体系。本发明可广泛应用于太白贝母的大棚集约化种植，缩短太白贝母药材的生产周期，降低生产成本，更好的满足了市场需要，还可用来培育脱毒贝母种苗，减少人工高密度种植过程中的病害发生，提高产量，减少农产品投入，降低成本。

主权项：1.一种以太白贝母鳞茎为外植体的组织培养方法，其特征在于：包括下述步骤：（1）外植体表面灭菌选择3-4年生健康无损伤的太白贝母鳞茎，将太白贝母鳞茎外层的鳞瓣掰开并冲洗干净；将冲洗干净的鳞瓣在超净工作台内进行表面灭菌；表面灭菌具体过程为，先用75%酒精处理10-20s，然后用无菌蒸馏水冲洗2次，随后再用0.1%升汞处理10-15min，最后用无菌蒸馏水冲洗3次；（2）初代培养；将经过步骤（1）处理后的鳞瓣切成绿豆大小的小块，并接种至初代培养基中，然后置于LED光照培养箱中培养60天；培养温度为20±2℃，光照时间为12hd，光照强度为1900-2100Lx；培养60天后，诱导出无菌鳞球茎；所述初代培养基由MS培养基、激素、蔗糖和琼脂组成；其中，所述激素为NAA和6-BA，或者NAA和ZT；所述激素为NAA和6-BA时，所述NAA的添加量为3.0mgL；所述6-BA的添加量为0.5-2.0mgL；所述激素为NAA和ZT时，所述NAA的添加量为3.0mgL；所述ZT的添加量为0.5-1.0mgL；所述蔗糖的添加量为25-35gL；所述琼脂的添加量为5-10gL；（3）增殖培养将步骤（2）所诱导出的无菌鳞球茎切成绿豆大小的小块，并接种至增殖培养基中，然后置于LED光照培养箱中培养40天；培养温度为20±2℃，光照时间为12hd，光照强度为1900-2100Lx；培养40天后，诱导出无菌鳞球茎；所述增殖培养基由MS培养基、激素、蔗糖、琼脂以及香蕉粉和或土豆泥组成；其中，所述激素为NAA和ZT，或者为NAA和6-BA；所述激素为NAA和ZT时，所述NAA的添加量为0.5-3mgL,所述ZT的添加量为0.5mgL；所述激素为NAA和6-BA时，所述NAA的添加量为1.5-3mgL,所述6-BA的添加量为0.5mgL；所述蔗糖的添加量为20-40gL；所述琼脂的添加量为5-10gL；所述香蕉粉的添加量为20-60gL；所述土豆泥的添加量为20-60gL；（4）诱芽培养将步骤（3）中诱导出的无菌鳞球茎从组织块上分离下来，并接种至诱芽培养基中，然后置于LED光照培养箱中培养50天；培养温度为20±2℃，光照时间为12hd，光照强度为1900-2100Lx；培养50天后，诱导出无菌芽；所述诱芽培养基由MS培养基、激素、蔗糖和琼脂组成；其中，所述激素为NAA和ZT；所述NAA的添加量为0.5-1mgL，所述ZT的添加量为1-2mgL；所述蔗糖的添加量为20-40gL；所述琼脂的添加量为5-10gL；（5）生根培养将步骤（4）中诱导出的无菌芽接种至生根培养基中，然后置于LED光照培养箱中培养40天；培养温度为20±2℃，光照时间为12hd，光照强度为1900-2100Lx；培养40天后，得到长出根系的太白贝母组培苗；所述生根培养基由12MS培养基、激素、蔗糖和琼脂组成；其中，所述激素为NAA和IBA；所述NAA的添加量为0.5-1mgL，所述IBA的添加量为0.5mgL；所述蔗糖的添加量为20-40gL；所述琼脂的添加量为5-10gL。

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