申请/专利权人：昆明理工大学

申请日：2023-09-14

公开（公告）日：2023-12-22

公开（公告）号：CN117265001A

主分类号：C12N15/84

分类号：C12N15/84;C12N15/65;A01H5/04;A01H6/56

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.01.09#实质审查的生效;2023.12.22#公开

摘要：本发明公开了一种农杆菌注射鳞茎芽点的岷江百合遗传转化方法，为解决岷江百合遗传转化体系周期长、转化率低的问题，本发明在鳞茎芽点注射含有目的基因的农杆菌，筛选获得了稳定表达目的基因的岷江百合植株，成功构建周期短、效率高的遗传转化体系；转化步骤包括野生型岷江百合鳞茎的制备、包含目的基因农杆菌的活化、鳞茎芽点注射、转基因岷江百合植株培养、阳性转基因植株筛选；实验结果显示转基因岷江百合植株的生长状况与野生型岷江百合没有显著差异，实时荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹、体式荧光显微镜、激光扫描共聚焦显微镜检测结果表明目的基因成功整合到岷江百合的基因组中且稳定表达；本发明方法可应用于基因功能验证以及转基因百合的培育。

主权项：1.一种农杆菌注射鳞茎芽点的岷江百合遗传转化方法，其特征在于，步骤如下：1采用岷江百合种子制备获得野生型岷江百合鳞茎；2农杆菌菌液的活化将含携带目的基因的植物表达载体的农杆菌菌液划线于含有20mgL利福平和50mgL卡那霉素的LB固体培养基中，于28℃培养两天；使用接种环刮取菌苔至含30mgmL乙酰丁香酮的MGL培养基中，28℃下震荡培养获得OD600为0.8的菌液；3岷江百合鳞茎芽点的注射选取直径大小约为2-3cm的鳞茎，剥去外层鳞片直至露出中心芽点，使用注射器吸取步骤2菌液，向芽点注射菌液至形成浸润圈，注射结束后，将鳞茎置于28℃下暗培养2天后，将其种于土壤中，在28℃温室中继续培养20-30天，筛选获得转基因岷江百合植株。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 昆明理工大学 一种农杆菌注射鳞茎芽点的岷江百合遗传转化方法

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