申请/专利权人：广州市食品检验所(广州市酒类检测中心)

申请日：2021-12-10

公开（公告）日：2022-09-16

公开（公告）号：CN114182030B

主分类号：C12Q1/689

分类号：C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/01

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2022.09.16#授权;2022.04.01#实质审查的生效;2022.03.15#公开

摘要：本发明提出唐菖蒲伯克霍尔德氏菌LAMP恒温快速检测方法，步骤有：1、准备待测DNA样品及LAMP恒温扩增特异性引物；其中LAMP恒温扩增特异性引物是选取唐菖蒲伯克霍尔德氏菌特异性基因序列进行合成得到，该基因采用唐菖蒲伯克霍尔德氏菌椰毒假单胞菌酵米面亚种水解酶cayF基因；所述LAMP恒温扩增特异性引物为：外引物F3、外引物B3、内引物FIB、内引物BIP、环引物LF、环引物LB；2、采用LAMP恒温扩增反应体系对待测DNA样品进行LAMP恒温扩增，检测扩增产物的荧光信号，得到检测结果。本发明对唐菖蒲伯克霍尔德氏菌特异性好、灵敏度高，可用于食品中唐菖蒲伯克霍尔德氏菌的快速检测。

主权项：1.唐菖蒲伯克霍尔德氏菌LAMP恒温快速检测方法，其特征在于包括有以下步骤：步骤1、准备待测DNA样品，以及准备对待测DNA样品进行LAMP恒温扩增的LAMP恒温扩增特异性引物；所述待测DNA样品经超微量分光光度计测定后，其A260A280在1.7-2.0之间，DNA浓度＞10ngμL，于-20℃保存备用；所述LAMP恒温扩增特异性引物是选取唐菖蒲伯克霍尔德氏菌特异性基因序列进行合成得到，所述唐菖蒲伯克霍尔德氏菌基因采用：唐菖蒲伯克霍尔德氏菌Burkholderiagladiolipv.cocovenerans水解酶cayF基因；所述特异性基因序列在唐菖蒲伯克霍尔德氏菌水解酶cayF基因中第195bp-389bp位置；所述LAMP恒温扩增特异性引物为：外引物F3：5’-CACCTTCCGCAAGACGC-3’外引物B3：5’-CGAAAACCCGCCTTCTGC-3’内引物FIB：5’-AGATGGCCGTGGGTGACGCCGCCCAAGGACATGTCGC-3’内引物BIP：5’-CACCGTGCTGCTGGTGCACGCTTGGGCACGAAGGAGA-3’环引物LF：5’-ACGCCGCGGATCTCGAA-3’环引物LB：5’-CGACAGCGCCACCATGT-3’步骤2、采用LAMP恒温扩增反应体系，对待测DNA样品进行LAMP恒温扩增，采用实时荧光PCR仪检测扩增产物的荧光信号，得到检测结果；其中，所述LAMP恒温扩增反应体系包括有所述LAMP恒温扩增特异性引物。

全文数据：

权利要求：

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