申请/专利权人：中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院

申请日：2022-06-21

公开（公告）日：2022-09-20

公开（公告）号：CN115074332A

主分类号：C12N5/10

分类号：C12N5/10;C12N15/12;C12N15/85;C12N15/65;C12R1/91

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2022.10.11#实质审查的生效;2022.09.20#公开

摘要：本发明公开了一种构建稳定表达绿色荧光蛋白的Huh7‑eGFP细胞株的方法，包括如下步骤：1pCEP4‑eGFP重组质粒的构建：将绿色荧光蛋白eGFP连接至高拷贝质粒载体pCEP4上，并转化感受态大肠杆菌；将转化后的大肠杆菌进行质粒提取，获得pCEP4‑eGFP质粒；2pCEP4‑eGFP质粒导入Huh7细胞：利用PEI转染试剂将pCEP4‑eGFP质粒转染进Huh7细胞中，然后将转染后的Huh7细胞扩大培养；再利用潮霉素B筛选Huh7细胞，将筛选得到的阳性Huh7细胞经有限稀释法后，获得阳性表达率高的Huh7细胞群；选择绿色荧光表达强的细胞克隆，继续扩大培养，并在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况，直至获得稳定表达绿色荧光蛋白的细胞株。该细胞株稳定性强，为下游肝细胞癌的治疗及药物筛选提供了很好的工具。

主权项：1.一种构建稳定表达绿色荧光蛋白的Huh7-eGFP细胞株的方法，其特征在于，包括如下步骤：1pCEP4-eGFP重组质粒的构建将绿色荧光蛋白eGFP连接至高拷贝质粒载体pCEP4上，并转化感受态大肠杆菌；将转化后的大肠杆菌进行质粒提取，获得pCEP4-eGFP质粒；2pCEP4-eGFP质粒导入Huh7细胞利用PEI转染试剂将pCEP4-eGFP质粒转染进Huh7细胞中，然后将转染后的Huh7细胞扩大培养；再利用潮霉素B筛选Huh7细胞，将筛选得到的阳性Huh7细胞经有限稀释法后，获得阳性表达率高的Huh7细胞群；选择绿色荧光表达强的细胞克隆，继续扩大培养，并在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况，直至获得稳定表达绿色荧光蛋白的细胞株。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院 一种构建稳定表达绿色荧光蛋白的Huh7-eGFP细胞株的方法

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