申请/专利权人：巴德生物科技有限公司

申请日：2022-12-15

公开（公告）日：2023-01-13

公开（公告）号：CN115595311A

主分类号：C12N5/12

分类号：C12N5/12;C12N5/078

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2023.12.08#发明专利申请公布后的驳回;2023.02.07#实质审查的生效;2023.01.13#公开

摘要：本发明公开了一种快速筛选单克隆细胞的方法和试剂盒，属于单克隆细胞筛选技术领域，主要包括以下步骤：S8、往捕获的目标细胞的微孔板中加入培养基，适合的条件下培养7～14天后，通过显微镜观察捕获的目标细胞，可见微孔中有单个细胞或者多个细胞团；S9、有单个细胞的微孔中的单个细胞即为已经筛选得到的单克隆细胞；S10、对于有多个细胞团的微孔，当细胞成团生长直到在半透膜上形成肉眼可见白色斑点时，能够用微针截取载有单个细胞团的半透膜，将载有单个细胞团的半透膜转移至新的培养容器中培养，从而获得单克隆细胞，本发明的快速筛选单克隆细胞的方法不仅能捕获目标细胞，还能以更快捷和对细胞损伤更小的方式完成对细胞的单克隆化。

主权项：1.一种快速筛选单克隆细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、用微球复溶液溶胀磁性微球，充分反应不低于3min，然后在离心机的离心力为1000～1500g下离心，离心完成后弃掉上清液，得到溶胀后的磁性微球；S2、用偶联缓冲液溶解蛋白或肽段，调节所述蛋白或肽段的浓度不低于1mgmL；S3、将溶胀后的磁性微球与所述蛋白或肽段按照1:4～20的摩尔比混合，在室温下反应30min～3h，使所述磁性微球与所述蛋白或肽段进行结合反应，得到反应后的磁性微球悬液；S4、通过离心处理的方法或磁力吸附聚集的方法，去除S3中得到的磁性微球悬液中未结合的所述蛋白或肽段，得到结合蛋白或肽段的磁性微球悬液；S5、将微孔板盒放置在磁力板上后，在所述微孔板盒中放置板条，形成微孔，在所述微孔板盒的上方安装板盖，组装成微孔板，所述微孔板盒设置有出液管口，所述板盖为两层中空的结构，所述板盖的底层设有出液孔，所述出液孔与所述微孔对应，所述板盖还设置有进液管口，关闭所述出液管口，从所述进液管口往所述微孔中加入5～20mL的所述结合蛋白或肽段的磁性微球悬液，室温下静置1～10min，使得结合蛋白或肽段的磁性微球在充分均匀附着在所述微孔底部的半透膜，所述半透膜能够允许缓冲液和细胞培养基透过，不允许细胞或者生物大分子透过，然后从所述出液管口排除所述微孔板盒中的液体；S6、将待分选地混合细胞制成细胞悬液，从所述进液管口加入所述细胞悬液，37℃孵育不超过60min；S7、将所述微孔板放置在所述磁力板上，以不少于5倍微孔板体积的细胞培养基连续灌注，没有与所述结合蛋白或肽段的磁性微球结合的细胞被冲洗出，随所述细胞培养基从所述微孔板盒的所述出液管口流出，与所述结合蛋白或肽段的磁性微球结合的细胞被吸附在所述微孔底部的半透膜上，与所述微孔底部的半透膜吸附细胞即为捕获的目标细胞；S8、往所述捕获的目标细胞的微孔板中加入培养基，适合的条件下培养7～14天后，通过显微镜观察所述捕获的目标细胞，可见所述微孔中有单个细胞或者多个细胞团；S9、有单个细胞的微孔中的所述单个细胞即为已经筛选得到的单克隆细胞；S10、对于有多个细胞团的微孔，当细胞成团生长直到在所述半透膜上形成肉眼可见白色斑点时，能够用微针截取载有单个细胞团的半透膜，将所述载有单个细胞团的半透膜转移至新的培养容器中培养，从而获得单克隆细胞。

全文数据：

权利要求：

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