申请/专利权人：大连博源医学科技有限公司

申请日：2022-01-14

公开（公告）日：2023-01-13

公开（公告）号：CN114324693B

主分类号：G01N30/06

分类号：G01N30/06;G01N30/14;G01N30/88;G01N30/86

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.01.13#授权;2022.04.29#实质审查的生效;2022.04.12#公开

摘要：本发明公开了一种血液中转甲状腺素蛋白TTR四聚体浓度测定的预处理和检测方法，包括如下步骤：血液过膜后加入小分子荧光探针，进行孵育，使小分子荧光探针与TTR特异性结合而产生荧光；孵育后的样本加入稀释剂进行稀释、离心、取上清液后，采用高效液相色谱进行分离，利用荧光检测器进行定量分析。本发明操作简便，可实现血液中TTR四聚体浓度的定量测定，并通过TTR总浓度减去TTR四聚体浓度得出TTR错误折叠浓度，还可通过保留时间定性鉴别TTR四聚体为野生型或变异型，具有良好的选择性，精密度和准确度。

主权项：1.一种血液中转甲状腺素蛋白TTR四聚体浓度测定的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：将血液样品进行预处理获得待测液，随后将待测液采用高效液相色谱或超高效液相色谱进行分析，通过校准曲线计算血液样本中TTR四聚体的浓度，其中所述预处理的步骤为：（1）血液过滤膜，加入小分子荧光探针，进行孵育；（2）加入稀释剂进行稀释；（3）离心，取上清液，作为待测液；其中，所述高效液相色谱或超高效液相色谱条件为：色谱柱为强阴离子交换柱或SEC色谱柱，柱温为30-50℃，进样器温度为10-20℃，流动相A为含乙二胺四乙酸（EDTA）的Tris-HCl缓冲体系，流动相B为含氯化钠（NaCl）和乙二胺四乙酸（EDTA）的Tris-HCl缓冲体系；所述Tris-HCl缓冲体系的PH为7-9；EDTA的浓度为500μmolL-2mmolL；NaCl的浓度为500mmolL-2molL，流动相流速0.3-1mLmin；梯度洗脱；进样量：5-50μL；其中，所述梯度洗脱参数为：第0min～3.00min：流动相B：24%；第3.00min～5.00min，流动相B：24%～32%；第5.00min～12.00min，流动相B：32%～38%；第12.10min～14.00min，流动相B：100%；其中，上述条件涉及分析时间、流动相A和B的体积百分比的各个数值参数的浮动范围为该数值参数±20%；其中，所述液相色谱所用检测器为荧光检测器，激发波长λex=278-378nm，发射波长λem=380-480nm，以1-10点秒的采样率监测，其中，在所述预处理方法中，步骤1所述小分子荧光探针包括二苯乙烯类似物或1,3,4-恶二唑磺酰氟类似物，其中，小分子荧光探针浓度为300µmolL-3mmolL，小分子荧光探针和血液的体积比为1:1-20。

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权利要求：

百度查询： 大连博源医学科技有限公司 一种血液中转甲状腺素蛋白(TTR)四聚体浓度测定的预处理方法和检测方法

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