申请/专利权人：重庆医科大学

申请日：2021-04-26

公开（公告）日：2023-04-11

公开（公告）号：CN113234798B

主分类号：C12Q1/6825

分类号：C12Q1/6825;C12Q1/70;C12N15/11

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.04.11#授权;2021.08.27#实质审查的生效;2021.08.10#公开

摘要：本发明公开了一种基于体外转录和G4‑ThT的荧光传感器及其制备与在HBVDNA检测上的应用，包括引物1、引物2、两种酶和硫黄素ThT；在逆转录酶作用下靶链与引物1杂交生成第一种DNA双链中间体，该中间体在T7RNA聚合酶催化作用下体外转录扩增产生短单链RNA；引物2与RNA单链杂交形成RNA‑cDNA，然后在AMV反转录酶的作用下逆转录形成cDNA，得带有富C链的DNA；之后引物1又与带有富C链的DNA杂交生成第二种DNA双链中间体，然后在T7RNA聚合酶作用下转录出带有RNAG4链的RNA，以此循环反应；RNAG4与硫黄素结合，增强荧光信号，收集荧光信号实现对HBVDNA的检测。本传感器灵敏度高、稳定性强、重现性好。

主权项：1.一种基于体外转录和G4-ThT的荧光传感器，其特征在于，包括一对引物链、T7RNA聚合酶、AMV反转录酶和硫黄素ThT，所述引物链包括DNA单链引物1和引物2，所述引物1包括T7序列部分和与靶链互补序列部分，所述引物2包括富C序列部分和与靶链相同序列部分；所述引物1的核苷酸序列为： 所述引物2的核苷酸序列为： 所述靶链可与引物1的互补序列部分杂交，在AMV反转录酶作用下在引物1和靶链的两端延伸出第一种DNA双链中间体，所述第一种DNA双链中间体包含T7RNA聚合酶识别位点，可在T7RNA聚合酶催化作用下体外转录扩增产生大量短单链RNA；所述引物2与RNA单链杂交形成RNA-cDNA，RNA-cDNA在AMV反转录酶的作用下逆转录形成cDNA，得到带有富C链的DNA；之后引物1又能与带有富C链的DNA杂交两边同时延伸成第二种DNA双链中间体，然后在T7RNA聚合酶作用下转录出带有RNAG4链的RNA产物，以此循环反应，产生大量的RNAG4；RNAG4可与硫黄素ThT结合，使本身荧光量子产率很低的ThT荧光量子产率急剧增高，通过收集荧光信号实现对HBVDNA的检测。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 重庆医科大学 基于体外转录和G4-ThT的荧光传感器及其制备与在HBV DNA检测上的应用

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