申请/专利权人：东北林业大学

申请日：2022-11-04

公开（公告）日：2023-09-26

公开（公告）号：CN116804203A

主分类号：C12N15/60

分类号：C12N15/60;C12N9/88;C12Q1/527;C12N15/70;C12N15/82;G01N30/02;G01N30/06

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.02.23#实质审查的生效;2023.09.26#公开

摘要：本发明涉及了防己科三个千金藤属物种云南地不容Stephaniayunnanensis、千金藤Stephaniajaponica和金线吊乌龟Stephaniacephalantha中缩合多巴胺和4羟基苯乙醛4‑HPAA生成去甲乌药碱的5个去甲乌药碱合酶NCSsSyNCS4、SyNCS5、SjNCS2、SjNCS4和ScNCS1及其编码基因与功能。属于基因工程技术领域。本发明公开了三个千金藤属物种5个NCS基因的开放阅读框序列以及其编码的氨基酸序列。本发明基于三个千金藤属物种基因组和转录组数据筛选候选NCS基因，通过构建pET28a‑NCSs原核表达载体，以多巴胺和4‑HPAA为底物在体外验证三个千金藤属物种NCS基因的功能。结果证明SyNCS4、SyNCS5、SjNCS2、SjNCS4和ScNCS1具有缩合多巴胺和4‑HPAA生成去甲乌药碱的功能，为具有重要药用价值的苄基异喹啉类生物碱BIAs的合成生物学研究奠定基础。

主权项：1.三个千金藤属物种中NCSs基因，其特征在于其是如下的基因a或基因b：基因a1：具有SEQIDNo.1所示核苷酸序列的基因。基因a2：具有SEQIDNo.2所示核苷酸序列的基因。基因a3：具有SEQIDNo.3所示核苷酸序列的基因。基因a4：具有SEQIDNo.4所示核苷酸序列的基因。基因a5：具有SEQIDNo.5所示核苷酸序列的基因。基因b1：具有SEQIDNo.1所示核苷酸序列经过替换、缺失或添加一个或多个碱基而得到的具有缩合多巴胺和4-HPAA生成去甲乌药碱作用的蛋白质。基因b2：具有SEQIDNo.2所示核苷酸序列经过替换、缺失或添加一个或多个碱基而得到的具有缩合多巴胺和4-HPAA生成去甲乌药碱作用的蛋白质。基因b3：具有SEQIDNo.3所示核苷酸序列经过替换、缺失或添加一个或多个碱基而得到的具有缩合多巴胺和4-HPAA生成去甲乌药碱作用的蛋白质。基因b4：具有SEQIDNo.4所示核苷酸序列经过替换、缺失或添加一个或多个碱基而得到的具有缩合多巴胺和4-HPAA生成去甲乌药碱作用的蛋白质。基因b5：具有SEQIDNo.5所示核苷酸序列经过替换、缺失或添加一个或多个碱基而得到的具有缩合多巴胺和4-HPAA生成去甲乌药碱作用的蛋白质。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 东北林业大学 云南地不容、千金藤和金线吊乌龟去甲乌药碱合酶筛选鉴定及应用

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