申请/专利权人：广西大学

申请日：2019-12-31

公开（公告）日：2023-10-03

公开（公告）号：CN111175501B

主分类号：G01N33/569

分类号：G01N33/569

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.10.03#授权;2020.06.12#实质审查的生效;2020.05.19#公开

摘要：本发明公开了一种母猪初乳中PEDV特异性SIgA抗体的ELISA检测方法，该法运用基因克隆、原核表达、多克隆抗体制备等技术，先从母猪初乳中克隆得到SIgA特有的成分SC片段，并构建原核表达载体对该片段进行表达，然后用PEDV病毒对制备的兔抗猪SC多克隆抗体进行包被，封闭后依次加入一抗、二抗和三抗各孵育1h，最后加终止液测OD450nm值。据此，发明人还研制了相应试剂盒。本发明具有经济、便捷、快速、准确的特点，为进一步探索母猪乳汁中PEDV特异性SIgA抗体的动态变化规律、PEDV粘膜免疫效果的评估以及免疫程序的优化提供了可靠的方法，也为预防PEDV对哺乳仔猪的感染提供科学依据。

主权项：1.一种母猪初乳中PEDV特异性SIgA抗体的ELISA检测试剂盒，包括包被酶标板，其特征在于：所述包被酶标板以PEDV病毒粒子作为包被抗原；试剂盒还包括包被液、封闭液、SC兔多抗、HRP标记山羊抗兔IgG、洗涤液、稀释液、底物液和终止液；所述PEDV病毒粒子由PEDV病毒液放置在紫外灯下灭活一个小时制备；所述SC兔多抗按以下方法制备：1猪SC片段基因的扩增及蛋白表达载体的构建从母猪初乳中对猪SC基因的110-374位氨基酸序列进行扩增，得到PCR产物；将PCR产物进行胶回收并克隆至pMD-18T载体上，与原核表达载体pET-32a进行双酶切，并对酶切产物进行回收和纯化后，通过T4连接酶在16℃的条件下进行酶切产物的连接，得到重组表达载体pET-32a-SC，并对其进行测序及双酶切鉴定；所述氨基酸序列为序列表SEQ.ID.No.3所编译；2重组质粒的诱导表达及检测将双酶切和测序结果均正确的重组质粒转化至BL21DE3pLysSChemicallyCompetentCell中并涂板培养，然后放置于37℃水平摇床进行扩增，待扩增的菌液OD值为0.6时，按照加入IPTG继续在37℃水平摇床诱导5h；将诱导好的菌液经离心，超声破碎等处理后进行SDS-PAGE电泳，以检测重组SC蛋白的表达情况和反应原性。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 广西大学 母猪初乳中PEDV特异性SIgA抗体的ELISA检测方法及其试剂盒

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