申请/专利权人：广州溯原生物科技股份有限公司

申请日：2019-01-28

公开（公告）日：2023-10-17

公开（公告）号：CN111593068B

主分类号：C12N15/85

分类号：C12N15/85;A61K48/00;A61P3/00;A61P39/06;A23L33/10

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.10.17#授权;2021.12.03#实质审查的生效;2021.12.03#著录事项变更;2020.08.28#公开

摘要：本发明公开了一种pIRES‑Rsirt24‑Tet‑nap重组质粒，其沿载体转录方向依次连接有R‑Sirt2基因、IRES序列、R‑Sirt4基因、HSVTKpolyA序列、tTA序列、TRE序列和nap序列，或者反向连接。其中，R‑Sirt2和R‑Sirt4基因的功能是重构线粒体网络并逆转衰老细胞表型；IRES序列则是连接sirtuin2基因和sirtuin4基因，使两者反向共表达；tTA和TRE是四环素诱导表达元件，调控DNA结合和分子伴侣介导自噬的肽段nap序列表达。本发明所述的自噬重组载体，采用IRES序列连接sirtuin2和sirtuin4基因，能在同一载体中共表达Sirtuin2和Sirtuin4蛋白，表达后由四环素元件调控质粒DNA细胞内自噬。故该重组质粒可用于基因治疗线粒体功能障碍相关疾病的药物中的应用。

主权项：1.一种pIRES-Rsirt24-Tet-nap双基因共表达自噬载体，其特征在于：其沿载体转录方向依次连接有CMV启动子、粘红酵母sirt2基因（Sirtuin2ofRhodosporidiumtoruloides，R-Sirt2）、IRES序列、粘红酵母sirt4基因（Sirtuin4ofRhodosporidiumtoruloides，R-Sirt4）、HSVTKpolyA序列、rtTA序列、TRE序列和nap序列、Kana抗性基因以及PUC质粒骨架元件；所述nap序列为分子伴侣介导自噬的含五肽基序的核酸肽段，所述五肽基序为“KFERQ”；将分子伴侣介导自噬的含有五肽基序的核酸肽段引入载体内，通过外源给予4-表强力霉素启动分子伴侣介导的自噬，诱导载体发生自噬，实现目的基因的外源质粒DNA载体在哺乳类细胞的高效可控表达；nap肽段的诱导表达启动分子伴侣介导的自噬，从而使外源的质粒DNA分子在细胞内自噬消失。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 广州溯原生物科技股份有限公司 新型基因治疗载体pIRES-Rsirt2/4-Tet-nap的制备方法及应用

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