申请/专利权人：上海宝藤生物医药科技股份有限公司;上海宝藤医学检验所有限公司;上海张江医学创新研究院

申请日：2021-11-02

公开（公告）日：2023-11-28

公开（公告）号：CN113943834B

主分类号：C12Q1/70

分类号：C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.11.28#授权;2022.02.08#实质审查的生效;2022.01.18#公开

摘要：本发明提供了一种恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019‑nCoV的引物探针组合及其应用，所述恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019‑nCoV的引物探针组合包括特异性扩增并检测2019‑nCoV的ORF1ab基因和核壳蛋白N基因的特异性引物对和探针；所述探针的结构包括从5’端到3’端顺次连接的5’端序列、荧光发生基团、四氢呋喃、间隔序列、荧光淬灭基团、3’端序列和C3阻断基团。本发明还提供了一种恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019‑nCoV的试剂盒及其以非疾病诊断和或治疗为目的的使用方法。所述试剂盒具有极好的灵敏度、特异性和准确性，检测效率高，具有极高的应用价值。

主权项：1.一种恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的试剂盒以非疾病诊断和或治疗为目的的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括：1提取样本的RNA；2将所得RNA与预混液按体积比为1:9.5混合，再加入体积分数为5％～10％的激活剂，在37～42℃下进行RPA恒温扩增，并使用阳性对照和阴性对照进行同步检测；3根据检测反应的Ct值进行判断；所述恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的试剂盒包括恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合；所述恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的试剂盒还包括缓冲液、酶混合物、激活剂、阳性对照和阴性对照；所述激活剂为Mg2+；所述恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合制成引物探针混合液；所述酶混合物包括结合单链核酸的重组酶、单链DNA结合蛋白、链置换DNA聚合酶和解旋酶；所述引物探针混合液、酶混合物和缓冲液制成预混液；所述预混液中，引物探针混合液、酶混合物和缓冲液的体积比为3:5:11；所述恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合包括特异性扩增并检测2019-nCoV的ORF1ab基因和核壳蛋白N基因的特异性引物对和探针；所述探针的结构包括从5’端到3’端顺次连接的5’端序列、荧光发生基团、四氢呋喃、间隔序列、荧光淬灭基团、3’端序列和C3阻断基团；扩增所述ORF1ab基因的特异性引物对的核苷酸序列如SEQIDNo.1～2所示，检测所述ORF1ab基因的探针的核苷酸序列如SEQIDNo.3所示；扩增所述核壳蛋白N基因的特异性引物对的核苷酸序列如SEQIDNo.4～5所示，检测所述核壳蛋白N基因的探针的核苷酸序列如SEQIDNo.6所示；所述恒温扩增快速核酸检测新型冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合还包括特异性扩增并检测内标基因GAPDH的特异性引物对和探针；扩增所述内标基因GAPDH的特异性引物对的核苷酸序列如SEQIDNo.7～8所示，检测所述内标基因GAPDH的探针的核苷酸序列如SEQIDNo.9所示。

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