申请/专利权人：南京农业大学

申请日：2023-08-30

公开（公告）日：2023-12-01

公开（公告）号：CN117143966A

主分类号：C12Q1/6841

分类号：C12Q1/6841;C12N15/11

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.12.19#实质审查的生效;2023.12.01#公开

摘要：本发明提供了一种甘菊4号同源染色体区分鉴定用BAC克隆及其应用，属于分子细胞遗传学研究技术领域。本发明首先利用甘菊HindⅢ酶切位点BAC文库随机筛选BAC克隆提取质粒，然后利用缺刻平移法将BAC质粒标记成荧光BAC探针制成杂交液，接着预处理甘菊根尖细胞有丝分裂中期染色体样品，将BAC探针和甘菊染色体样品进行杂交，经过显微镜观察和图像分析，最终发现一个特异BAC克隆能够将甘菊1对同源染色体进行区分和鉴定，比对序列发现特异信号定位在甘菊4号同源染色体上。本发明所提供的探针和方法能够高效、准确地区分甘菊4号同源染色体，操作简便，与传统方法相比显著提高了甘菊4号同源染色体的鉴定速度和鉴定准确性。

主权项：1.一种甘菊Chrysanthemumlavandulifolium4号同源染色体区分鉴定用BAC克隆，其特征在于，所述甘菊4号同源染色体区分鉴定用BAC克隆的获得方法包括以下步骤：1从甘菊HindⅢ酶切位点BAC文库中随机挑选BAC克隆，并提取BAC质粒；2利用缺刻平移法将所述BAC质粒标记为荧光BAC探针；使用两种BAC质粒缺刻平移标记体系，绿色信号标记体系和红色信号标记体系；所述绿色信号标记体系包括：10×NEBuffer2.0μL，dNTPs2.5μL，BAC质粒16.0μL，ddH2O2.7μL，DNAPolymeraseIE.coli0.8μL，DNaseI0.5μL，Fluorescein-12-dUTP0.5μL；所述红色信号标记体系包括：BAC质粒16.0μL，DIGNickTranslationMix4.0μL；所述标记方法为：将所述标记体系于0.2mLPCR管中混匀，金属浴避光标记90min，取出后加入1μL0.5MEDTA溶液终止反应，即制得所述荧光BAC探针；3将所述荧光BAC探针制备成BAC探针杂交液；所述杂交液每个制片使用量的成分组成为：dFA7.5μL，20×SSC1.2μL，体积百分比为50.0％的硫酸葡聚糖DextranSulfate3.0μL，所述荧光BAC探针2.0μL，ddH2O1.3μL；所述制备方法为：将所述成分组成于PCR管中混匀，振荡离心后置于PCR仪中95℃变性13min，取出后迅速置于冰上处理6min以上，即制得所述BAC探针杂交液；4使用所述BAC探针杂交液进行甘菊高分辨率染色体荧光原位杂交，产生特异信号且测序后与NCBI中甘菊基因组序列比对并定位后发现其信号位于甘菊4号同源染色体末端的，即为所述甘菊4号同源染色体区分鉴定用BAC克隆。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南京农业大学 一种甘菊4号同源染色体区分/鉴定用BAC克隆及其应用

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD