申请/专利权人：广州湾区生物基因科技有限公司

申请日：2023-09-14

公开（公告）日：2023-12-26

公开（公告）号：CN117286106A

主分类号：C12N5/079

分类号：C12N5/079;C12N5/0735;A61K35/30;A61P27/02;A61P9/10

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.01.12#实质审查的生效;2023.12.26#公开

摘要：本发明属于医学视网膜类器官技术领域，具体公开了一种小鼠视网膜类器官及其终末分化的细胞系、其构建方法和应用，所述小鼠视网膜类器官及其终末分化的细胞系的构建方法依次通过小鼠胚胎干细胞经体外诱导扩增、诱导小鼠胚胎干细胞团簇向视网膜原基分化、诱导视泡结构发育并出现视杯结构、进一步诱导视杯结构发育，从而获得成熟的小鼠视网膜类器官及其终末分化的细胞系，并将视网膜祖细胞建库与储存，整个构建方法可形成标准化流程和质量控制体系，在产业化方面具备很强的自主研发的能力，与人视网膜类器官相比，耗时短、成本低，可标准化、规模化生产，实验成本大大压缩了90％以上。

主权项：1.一种小鼠视网膜类器官及其终末分化的细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、扩增小鼠胚胎干细胞：将mESC依次在MEF饲养层培养体系、无MEF饲养层培养体系条件下短期连续传代，制备mESC单细胞悬液；步骤2、诱导小鼠胚胎干细胞团簇向视网膜原基分化：将mESC单细胞悬液以5000个孔的密度接种到U型底细胞培养板进行三维体外培养，胚胎干细胞不断扩增、细胞团簇进一步堆叠向视网膜原基分化，直至出现视泡结构；步骤3、诱导视泡结构发育并出现视杯结构：将培养基更换为视泡培养基，促使视泡结构进一步发育，直至出现视杯结构；步骤4a-1、进一步诱导视杯结构发育：将培养基更换为视杯培养基，促使视杯结构进一步发育；步骤4a-2、获得成熟的小鼠视网膜类器官及其终末分化的细胞系：将培养基更换为视网膜类器官培养基，获得成熟的视网膜类器官及其终末分化的细胞系；步骤4b、视网膜祖细胞建库与储存：将步骤3获得的视泡结构进行组织消化，获得视网膜祖细胞悬液，添加视网膜祖细胞培养基传代培养3次，获得视网膜祖细胞系并使用视网膜祖细胞冻存液储存。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 广州湾区生物基因科技有限公司 一种小鼠视网膜类器官及其终末分化的细胞系、其构建方法和应用

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