申请/专利权人：中国农业大学

申请日：2023-10-30

公开（公告）日：2023-12-22

公开（公告）号：CN117264863A

主分类号：C12N1/21

分类号：C12N1/21;C12N15/57;C12N15/74;C12N15/66;A23L33/135;A61K38/48;A61K47/46;A61P3/04;C12R1/46

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.01.09#实质审查的生效;2023.12.22#公开

摘要：本发明提供了一种重组表达Amuc_1631的乳酸乳球菌的构建方法及应用，所述构建方法包括：Amuc_1631基因密码子的优化，重组质粒pNZP9的构建，以及乳酸乳球菌重组菌株的制备，最终获得重组表达Amuc_1631的乳酸乳球菌。本发明以乳酸乳球菌为出发菌、构建得到的重组表达Amuc_1631的乳酸乳球菌，能够在恶劣的胃肠道环境中生存并定植；更为重要的是乳酸乳球菌不含内毒素，能够直接服用并与重组表达的治疗因子——P9蛋白协同发挥益生作用，因此本发明构建获得的重组表达Amuc_1631的乳酸乳球菌，作为递送治疗和预防药物的理想载体。

主权项：1.一种重组表达Amuc_1631的乳酸乳球菌的构建方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤1，Amuc_1631基因密码子的优化按照乳酸乳球菌密码子偏好性、对Amuc_1631基因密码子进行优化，优化后的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示；在优化后的Amuc_1631基因密码子序列的N端，加入Usp45信号肽核苷酸序列，获得Usp45信号肽—Amuc_1631基因片段；步骤2，重组质粒pNZP9的构建S21，Usp45信号肽—Amuc_1631基因片段的扩增：设计特异性引物组，利用PCR扩增所述Usp45信号肽—Amuc_1631基因片段；S22，构建重组质粒：使用NcoI和HindIII对质粒进行双酶切，将酶切后的质粒载体片段、Usp45信号肽—Amuc_1631基因片段混合、连接，形成重组质粒pNZP9；步骤3，乳酸乳球菌重组菌株的制备利用电转化法将步骤2构建得到的重组质粒pNZP9转化至乳酸乳球菌中，筛选得到阳性重组子，即为重组表达Amuc_1631的乳酸乳球菌。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国农业大学 一种重组表达Amuc_1631的乳酸乳球菌的构建方法及应用

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